Разработка основных биотехнологических процессов производства и системы управления качеством липидных косметических препаратов (на примере тоников для проблемной кожи)

	Загрузить архив:
	Файл: ref-22300.zip (313kb [zip], Скачиваний: 181) скачать

НАУЧНО – ПРОИЗВОДСТВЕННОЕ ОБЪЕДИНЕНИЕ «ПУЛЬС»

НА ПРАВАХ РУКОПИСИ

Бабина Елена Ивановна

Разработка основных биотехнологических процессов производства   исистемы управлениякачеством липидных косметических препаратов

(на примере тоников для проблемной кожи)

03.00.23 – биотехнология

ДИССЕРТАЦИЯ

на соискание ученой степени

кандидата биологических наук

Научный руководитель: Кузякова Л.М.

доктор фармацевтических наук,

профессор

Ставрополь – 2004

СОДЕРЖАНИЕ

	стр.
Введение	5
Глава 1. Современное состояние и тенденции развития биотехнологии и методов стандартизации липидных косметических препаратов для проблемной кожи (обзор литературы)	10
1.1. Рольлипидных косметических препаратов для ухода за проблемным типом кожи.	10
1.2. Использование липидов в производстве косметических и медицинских препаратов	16
1.2.1. Проблемы и перспективы использования липидов в производстве косметических и медицинских препаратов	16
1.2.2.Изучение технологии  инкапсулирования в косметике	23
1.2.3.Современные тенденциииспользования липосом в косметологии	31
1.3.Тенденции применения растительных масел в производстве  липиднойкосметической продукции	34
1.4. Актуальностьконтроля качества и безопасности парфюмерно-косметической продукции	37
1.4.1 Стандартизация, как основа безопасности продукции	37
1.4.2.Проблемы качества и безопасностипарфюмерно-косметической промышленности	40
1.4.3.Современное состояние стандартизации и сертификации парфюмерно-косметической	44
1.4.4. Система управления качеством производства косметической продукции	48
Глава 2. Материалы и методы исследований	55
2.1 Характеристика материалов, вспомогательных веществ и оборудования, применяемых в исследованиях	53
2.2. Методы исследования (объективные и субъективные)	56
Глава 3. Разработка основных биотехнологических процессов производства тоников для проблемной кожи (результаты собственных исследований)	66
3.1.Подбор компонентов для производства тоников для проблемной кожи.	66
3.1.1. Разработка состава  фитокомпозиции	66
3.1.2.Выбор вспомогательных сырьевых компонентов	72
3.2. Разработка биотехнологии приготовления тоника для проблемной кожи.	76
3.3. Экспериментальное исследование биологической активности фосфолипидных тоников	85
3.3.1.Изучение противовоспалительного действия	85
3.3.2.Изучение ранозаживляющего  действия	88
3.3.3.Изучение увлажняющего действия тоника	95
ГЛАВА 4. Разработка системы управлениякачеством липидных косметических препаратов (результаты собственных исследований)	98
4.1.Изучение причины несоответствия  качества продукции требованиям нормативной документации	98
4.2.Разработка программымониторинга производства липидных косметических препаратов	99
4.3. Разработка   системы управления качеством производством липидных косметических препаратов	124
Выводы	129
Заключение	132
Список литературы	133

ПРИНЯТЫЕ СОКРАЩЕНИЯ

БАВ              -       биологически активные вещества

ЖЭ                -       жировая эмульсия

ЖК                -       жирные кислоты

ФК                -       фитокомпозиция

ФЛВ              -       фосфолипидные везикулы

КМАФАнМ -       количество мезофильных анаэробных и факультативно-                                      

                              анаэробных микробов

ЛРС               -      лекарственное растительное сырье

МИК             -       минимальная ингибирующая концентрация

НД              -        нормативная документация

ОБТК          -         отдел биологического и технического контроля  

ОЛ                 -       общие липиды

ПОЛ              -   перекисное окисление липидов

ПНЖК          -       жирные полиненасыщенные кислоты

СМК-         система менеджмента качества

ТБ               -          техника безопасности

ТСХ           -        тонкослойная хроматография

ЦД                -         циклодекстрины

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность исследования. В последнее время во многих исследовательских центрах развернут широкий фронт работ фундаментального и прикладного характера, направленный на всестороннее изучение обширной группы природных биологически активных соединений, объединяемых общимклассификационным названием «липиды». Современные представления, основанные на результатах глубоких структурно-функциональных исследованиях   (Швец В.И., 2001, Ефременко В.И., 2003), отводят липидам и их над молекулярным клеточным образованием – биологическим мембранам – важнейшую роль в функционировании основных биохимических механизмов в коже. Данные механизмы определяют и регулируют физическое состояние клетки, еевзаимодействие, как с соседними клетками, так и с факторами окружающей внешней среды (Бергельсон Л.Д., 1987). Возрастающие  потребностифармацевтической и косметической    отраслейпромышленностиделают  актуальнойзадачуподбора  доступныхсырьевыхресурсов  иразработкуоптимальных  биотехнологических процессов производства природныхлипидных препаратов для ухода за кожей лица. Препараты природного происхождения отличаются от синтезированных химических соединений  совершенной формулой, включающей оптимальное соотношение микро- и макроэлементов, витаминов и незаменимых жирных кислот.

В течение всей своей жизни человек активно пользуется тем или иным видом парфюмерно-косметической продукции (мыло, шампунь, зубные пасты, кремы и т.д.). В связи свозможностью проникновения данных средств через кожный барьер и слизистую оболочку с последующим влиянием на отдельные органы человека, разработка методов стандартизации и сертификации, обеспечивающие безопасностьданной продукции, приобретают особое значение. За последние 4 года в России было забраковано 12%косметической продукции, представленной в органы стандартизации и сертификации (Вилкова С.А., 2003).Особенно тревожит тот факт, что токсичными свойствами обладали 13,6% продукции, а 22,7% их средств имели микробиологическую загрязненность, то есть напрямую угрожали здоровью потребителей. Одновременно качество продукции  является результатом рыночной политики самого предприятия и залогом успешных продаж производимого им товара.  Наличие сертификата системы менеджмента качества, отвечающих требованиямИСО 9000 - это гарантиябезопасности здоровья населения ипрямые конкурентные преимущества предприятия - производителя нарынке.

Цель и задачи исследования. Целью данного исследования является разработка биотехнологических процессов конструирования  липидных тоников для ухода за воспаленной кожейи системы управления качеством их производства. Длядостижения поставленной целиследовало решить следующие задачи: 1.На основе биомоделирования разработать рецептуру липидных тоников для ухода за кожей в домашних и профессиональных условиях;

1.Провести подбор доступного эффективного природного сырья;

2.Разработать биотехнологические процессы конструирования липидных тоников для очищения воспаленной кожи;

3.Выяснить эффективность комплексного воздействия на кожу липидного тоника и липосомального крема, имеющего идентичный состав фитокомпозиции;

4.Разработатьсистему контроля качества липидных тоников на всех этапах технологического процесса;

5.Разработать систему управления качеством и создать алгоритм  управления контролем качества  производства липидных  косметическихсредств.

Научная новизна. Разработаны рецептуры тоников для ухода за проблемной кожей лица в домашних и профессиональных условиях. С помощью биологической модели Staphylococcusaureus доказана целесообразность введенияв рецептуру противовоспалительнойкомпозиции, содержащейследующее соотношение лекарственного растительного сырья: по 4 части шалфея и календулы и по 1 части ромашки, крапивы и зверобоя. Дополнительно в состав тоников введена родниковая слабоминерализованная вода, содержащая макро- и микроэлементы, участвующие в ранозаживляющих и регенерационных процессах кожного покрова.

Разработаны основные биотехнологические процессы   конструированиялипидных тоников для очищения проблемной кожи. Определены параметры технологических операций. Оригинальность разработок доказывают  положительные решения о выдаче двух патентов на изобретение РФ (№200310425415 от 27.04.2004 и №200310425515 от 19.05.2004).

Разработана система комплексного мониторинга и подобраны методы контроля качествана всех этапах технологического процесса, а также впервые предложены для определения качества сырья, полупродуктов и готовой продукции методы, отсутствующие в нормативнойдокументации на косметические средства. Так, доказана необходимость проверки жирно-кислотного составарастительных   масел в процессе выбора эффективного сырья для производства липидных препаратов. Срок хранения липидных препаратов предложено определять с помощью микробиологического анализа,показателей перекисного числа и органолептических свойств.

Впервые для производства липидных косметических препаратовсоставлены Положение и алгоритм управления качеством, позволяющие оптимизировать научно-методические основы мониторинга косметической продукции в соответствии с требованиями международного стандарта ИСО 9000. Внедрение данной системы в производство имеет социальный и экономический аспекты, так как обеспечивает выпуск безопасной высококачественной продукции и увеличивает конкурентоспособность предприятия.

Практическая значимость и результаты внедрения. Работа выполнялась по заказу НПО «Пульс», которое производит липидные косметические препараты. Тоники прошли производственную апробацию, имеют санитарно-эпидемиологическое заключение и сертификат соответствия и в настоящем времени выпускаются в промышленном объеме (акт от 19.05.2004).Результаты экспериментальных исследований комплексного использования для воспаленной кожи тоников и липосомального крема внедрены в работу Центра красоты и здоровья «Альпика» г. Ставрополя (акты №№ 7,8 от 25.03.2004). Испытание эффективности применениятоника серии«ProfiLine» совместно с кремом для проблемной кожи  проводил врач-дерматолог поликлиники № 9 вг. Ставрополе иподтвердил усиление планируемого терапевтического эффекта.

Разработаны и утверждены НД на липосомальные тоники для проблемной кожи, в т.ч. опытно-промышленный регламент (№05 от 2004 г.), ТУ 9152-018-10280704-04,Положение по управлению качеством производства трансдермальныхлипидных косметических препаратов (акт от 27.05.04). Данные документы внедрены в работу НПО «Пульс» (акт от 17.04.04).

Разработанаи внедрена в учебный процесс кафедры анатомии, физиологии и гигиены человека Ставропольского Госуниверситета программа учебной практики по дисциплине специализации «Физиология человека и животных".

Основные положения, выносимые на защиту. 1. Результаты использованияStaphylococcusaureusв качестве биологической модели для определения эффективности действия лекарственных травпозволяют разработать рецептуру препаратас заданными свойствами.

2.Результаты введение в состав тоников для проблемной кожи фитокомпозиции и родниковой воды, богатой макро- и микроэлементами, позволяют повысить их биологическую активность.

3. Тоники для ухода за проблемной кожей лица в косметологических кабинетах содержат повышенное количество биологически активных веществ.

4. Комплексное использование липидных тоников и липосомальных кремов повышают противовоспалительное и ранозаживляющее действие препаратов.

5. Итоги внедрение системы  управления качеством на производстве  имеют важный социальный и экономический аспекты, так как увеличивают выпуск безопасной высококачественной продукции и повышают конкурентоспособность предприятия.

6. Разработка алгоритма управления контролем качества на производстве оптимизирует научно-методические подходы к мониторингу качества парфюмерно-косметической продукции и увеличивают ее безопасность.

Апробация работы и публикации. Основные положения диссертации доложены на Международной научно-практической конференции «Биоресурсы, биотехнологии, инновации юга России» (Пятигорск, 2003); IV Международной научно-практической конференции «Здоровье и образование в ХХI веке» (Москва, 2003); 58-й и 59-й Межрегиональных конференциях по фармации и фармакологии «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» (Пятигорск, 2003, 2004); Международной конференции «Современные достижения фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины» (Астрахань, 2004); Межрегиональной конференции «Здоровый город: план действий сегодня. Партнерство бизнеса, личности и власти» (Ставрополь, 2004). Материалы диссертационной работы представлены в 8 публикациях.

             Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, глав обзора литературы,методов и материалов исследования, двух глав собственных исследований, заключения, общих выводов, списка использованной литературы. Общий объем диссертации – 144 машино­писных страниц. Список литературы включает 133  наименования, в том числе 61 источник иностранных авторов. Работа содержит 19 таблиц и 19 рисунков.

ГЛАВа 1. Современное состояниеиТЕНДЕНЦИИ  РАЗВИТИЯ БИОТЕХНОЛОГИИ И МЕТОДОВ СТАНДАРТИЗАЦИИЛИПИДНЫХ  КОСМЕТИЧЕСКИХПРЕПАРАТОВДЛЯ  ПРОБЛЕМНОЙКОЖИ

(обзор литературы)

1.1. Рольлипидных косметических препаратов для ухода за проблемным типом кожи

Кожа (cutis) образует внешний покров организма, площадь которого у взрослого человека достигает до 2 м². Из производных кожи у человека имеются сальные и потовые железы, волосы и ногти. В коже человека выделяют эпидермис, дерму и подкожно-жировую клетчатку (гиподерму). В свою очередь эпидермис состоит из пяти слоев: базального, шиповатого, зернистого, блестящего и рогового (Чернух А.М., 1982). Каждый из вышеперечисленных элементов кожи играет свою роль в организме. Так, в базальном слое (stratumbazale)располагаются клетки, способные вырабатывать меланин – меланоциты. Присутствие в клетках зернистого слоя (stratum grantlosum)комплекса кератогиалина с тонофибриллами   указывает на то, что в них начинаются процессы ороговения, так как кератогиалин является предшественником рогового вещества – кератина. Другой предшественник кератина – эледин, располагается в блестящем слое (stratumlucidum). Роговой слой (stratumcorneum) обладает большой упругостью и плохой теплопроводимостью. Он содержит кератин (белок, содержащий до 5 % серы), который устойчив к действию кислот и щелочей.

Нейтральные жиры составляют основную массу подкожно-жировой клетчатки. Клетчатка содержит до 70 %триоленов,являющихся  легкоплавкими триглицеридами. Другие липиды (стерины, стероиды, фосфолипиды) содержатся в клетках эпидермиса и соединительной ткани, в стенках сосудов и в секрете сальных желез (Калантаевская К.А., 1972). Роль липидов в коже складывается из трех составляющих: формирование эпидермального барьера, участие в метаболизме биологически активных молекул и повышение проницаемости рогового слоя для других активных компонентов (Hexsel D.M., 2000).   При нанесении на кожу, липиды жиров и масел восстанавливаются вмежклеточные липидные пласты, меняя их свойства. Если в масляной фазе преобладают ненасыщенные липиды, то липидная прослойка между корнеоцитами становится  подвижной и лучше пропускает водорастворимые вещества (Кучеренко Н.Е., 1985).

Нарушениелипидного обмена является причинойряда воспалительных заболеваний, большинство из которых являются болезнями накопления, так как в результате недостаточности определенного фермента, участвующего в обмене липидов, в клетках обнаруживают аномально большие количества нерасщепленного  субстрата соответствующего фермента. К таким заболеваниям относят фурункулез, пиодермию, себорею, а также угревую сыпь. Фурункулез – хроническая рецидивирующая стафилодермия, характеризуется появлением фурункулов.При этом наблюдается острое гнойно-некротическое воспаление волосяного фолликула и окружающей соединительной ткани. Этот процесс сопровождается изменением рН кожи в щелочную сторону и уменьшением ее самостерилизующих свойств. Фурункулез обусловлен внедрением в организм патогенных микроорганизмов, чаще всего стафилококков ( Aekermann, H.-W., 1987).

Пиодермия – группа острых и хронических воспалительных процессов, вызываемых стафилококками, стрептококками, реже синегнойной и кишечной палочками.

Недостаток в   коже витамина А играет определенную роль в развитии себореи – нарушении функции сальных желез. В основе заболевания лежит дисфункция в системе гипофиз – половые железы. Переутомление, стресс, органические заболевания способствуют патологическому процессу (Бутова О.А., Кузякова Л.М., Андреева И.Н., 2003).

          Угревая сыпь наносит значительный ущерб  внешности, хотя и не представляет опасности для жизни людей и не влияет на их работоспособность. Угри обыкновенные – эта распространенное заболевание кожи, которое поражает людей обычно в пору полового созревания. Кроме обыкновенных существует много разновидностей угрей, однако патогенез и основные принципы лечения их схожи (Марголина, 2003).

           Впатогенезе угревой сыпи участвуют: гиперкератоз протоков сальной железы, закупорка их отмершими клетками и кожным салом, повышение секреции кожного сала в ответ на андрогенную стимуляцию, колонизациясальной железы бактериямиPropionibacterium acnes, а затем и другими микроорганизмами (Allenby, A.C , 1969, Aekermann, H.-W, 1987).

          Основной причиной патогенеза угревой сыпи является избыточная секреция сальных желез (Blank, I. H., 1964,Spruit D., 1966,Spruit D., 1969). Существуют две основные причины повышенной жирности кожи: генетическая предрасположенность (наличие на коже большого количества крупных сальных желез, активно секретирующих кожное сало) и гормональные факторы (андрогены стимулируют секрецию кожного сала, влияют на деление клеток сальных желез) ( (Shaw J. C., 2002).

           Одним из популярных методов при лечении акне - использование антибиотиков, влияющих на штаммы микроорганизмов, находящихся на коже. Однако, в 1998 годуA. J. Cooper    сделал вывод о связи между неудачами в лечении акне и колонизацией на кожеантибиотико-устойчивых бактерий. Общий процент случаев устойчивости к антибиотикамвозрос с 20 % в 1978 году до 62 % в 1996 году. Чаще всего устойчивость отмечалась к эритромицину,тетрациклину, доксициклину ( Марголина А., 2003).

   Исследования, проведенные английскими учеными в городе Лидсе (CoatesP., VyakrnamS., EadyE. A.,2002), позволили установить, что количество пациентов, имеющих устойчивые штаммы бактерий к одному или более антибиотикам, используемым при лечении угревойсыпи, возросло от 34, 5 % в 1991 году, до 55,5 % в 1997 году, затем оно упало до 50 %  в 1998 году и снова возросло до 55,5 % в 2000 году.Колонизация  антибиотико-устойчивых бактерий на коже сейчас встречается горазда чаще, чем 10 лет назад, что сильно усложняет антибиотикотерапию при акне, а также заставляет применять альтернативные средства при  лечении угрей.

Установлено, что при акне необходимо максимально щадящее очищение. Вместо агрессивных очищающих составов и спиртовых растворов лучше применять специальные мягкие очищающие средства, которые не повреждают кожу, а также тоники с низким содержанием спирта и антисептическими растительными экстрактами (Корсун В.Ф., 1995).

Практически все средства,    применение которых при воспалительных процессах обосновано патогенетически, а эффективность подтверждена клиническими исследованиями, в той или иной степени раздражают кожу. Этосвязано  стем, что помимо удаления кожного сала, в них растворяется и часть эпидермальных липидов(Shaw, J.C, 2002). Так, например, салициловая кислота, которая является одной из наиболее часто применяемых   активных добавок в препараты, применяемые для борьбы с акне, обладает отшелушивающим и противовоспалительным эффектом.Но, подобно всем средствам от угрей, онараздражает и сушит кожу (Gibson J. R, 1996).     

В настоящее время достаточно широко применяетсясредство для профилактики угревой сыпи, которое в качестве активного начала включает спиртовой экстракт пресноводной губки бодяги. Недостатком данного косметического средства является усиленная эксфолиация ороговевших клеток эпителия, которая в некоторых случаях может катализировать воспалительные процессы. Отмечено также отсутствие регенерирующего и витаминизирующего воздействия на кожу.

Существует биологически активная добавка для косметических изделий, представляющая собой липидныйкомплекс, полученный путем спиртовой экстракции сенны и содержащая углеводы, стеарины, каротиноиды, производные хлорофилла, белки, токоферол, жирные кислоты, минеральные вещества. ( Пат.РФ №2053763, А61 К7/48). Добавка включается в различные косметические средства, например, в лосьоны для ухода за кожей лица и оказывает активное биологическое воздействие на липидныйобмен. Косметологи отмечают, чтоиз-за высокого содержания спирта данный препарат вызываетчувство жженияи  аллергическую реакцию.     

В разработке тоников для проблемной кожи компании «Academie» (Франция) применяют такие растительные экстракты какромашка, календула, береза, чистотел, крапива, зверобой и т.д., а также некоторые эфирные масла. Растительные экстракты действуют не так быстро и эффективно какантибиотики, но они более безопасны, и ими можно пользоваться длительное время, к тому же, они содержат помимо липидного комплекса, витамины, природные антиоксиданты и многие другие биологически активные вещества, полезные для кожи. ( MantleD., 2002).

Научно-исследовательский центр   Швейцарской фирмы Mila d ^, Opiz включил в состав многих средств профессиональной косметики для проблемной кожиэкстракты растительных трав. Известные французские косметические компании, такие как «Кристиан Диор»и «Л^, Ореаль», использовали для технологии производства тоников для очистки проблемной кожиспиртовые экстракты фитосборов.

В ходе изучения литературных данных (Гончарова Т.П., 1998)  установлено, что каротиноидыи флавоноиды, обладают антиоксидантными свойствами, ингибируя избыточное количество перекисных соединений, которые разрушают мембраны клеток кожи. Кроме того, каротиноиды и флавоноиды обладают  противовоспалительным, капилляроукрепляющим действием, регулируют жировой, минеральныйи водный обмены, процессы регенерации эпидермиса, обладают бактерицидными и фунгицидными свойствами (Петрухина А. Т., 2003 ).

Органические кислоты (муравьиная, аскорбиновая, яблочная, щавелевая и другие)способствуют очищению пор кожи, обуславливая лучшее усвоение питательных и лечебных соединений(Burch, G.E., 1946,TregearR.T., 1966IgarashiO., 1991). Сапонины, стероиды и алкалоиды оказывают тонизирующее действие, повышая функциональную активность нервных окончаний, способствуя более быстрому обновлению кожных тканей (Корсун В.Ф., 1995).

В настоящее время, в связи с разработкой и активным внедрением в экспериментальную медицину биофизических и биохимических методов исследования, произошли значительные изменения во взглядах на кожный барьер. Усовершенствование техники экспериментальной микроскопии позволило не только определить точный состав липидов рогового слоя, но и «увидеть» их. Сформулированы основные понятия современной теории эпидермального барьера (Э. Эрнанденс, 2001):

    - основной барьерной структурой эпидермиса, от которой зависит его проницаемость, является роговой слой;

-имеется два основных пути проникновения веществ через кожу – трансэпидермальный (через роговой слой) и трансфолликулярный (через сальные железы и волосяные фолликулы, связанные с сальными железами);

    -межклеточные промежутки рогового слоя заполнены липидами (именно этим объясняется факт прохождения через роговой слой жирорастворимых веществ);

- липиды рогового слоя организованы и формируют двухслойные пласты;

- на барьерную функцию эпидермиса влияет не только расположение липидов, но и их количественный и качественный состав.

Абсорбция веществ, нанесенных на кожу – процесс пассивный, и во многом определяется физико-химическими свойствами самого вещества (Arct, 2001), такими как :липофильность, размер молекулы (частица, размером более чем 3 кДа не проходит через роговой слой), заряд (роговой слой неполярен, поэтому заряженным веществам через него трудно проходить), связывание со структурными компонентами кожи. Кроме того, на пенетрацию могут влиять и такие внешние факторы как толщина рогового слоя, возраст, кровоснабжение, метаболизм, температура, время контакта, климат. Важную роль играет основа, в которой находится вещество (ее физико-химические свойства, поверхностная активность, рН).

             В косметической рецептуре биологически активные вещества комбинируются с различными соединениями, которые придают продукту определенные свойства и могут влиять на поведение активных компонентов в коже.

Использование липидов в производстве косметических и медицинских препаратов

                  Поиск и создание новых классов косметических средств с улучшенными фармакологическими свойствами составляют одно из актуальных направлений медико-биологической науки. В последнее время во многих исследовательских центрах развернут широкий фронт работ фундаментального и поискового характера, направленный на всестороннее изучение обширной группы природных биологически активных соединений, объединяемых общим  классификационным названием «липиды».

1.2.1. Проблемы и перспективы использования липидов в производстве косметических и медицинских препаратов

             

         Отдельные типы природных липидных веществ, их биологически активные молекулярные фрагменты и модифицированные синтетические аналоги привлекают большое внимание исследователей как перспективный источник для конструирования лекарственных и диагностических препаратов нового поколения (Элькина Б.И., 1986). Среди огромного множества природных липидов наиболее биологически значимыми являются фосфо- и гликофосфолипиды (Bangham, A.D., 1964). Фосфолипиды, хотя и в относительно небольших количествах, повсеместно распространены в клетках органов и тканей всех типов живых организмов, причем повышенные концентрации этих природных веществ наблюдаются в таких важных органах, как головнойи спинной мозг, сердечная мышца, печень, легкие и др. (PetkauA. , 1967). В мембранах имеются фосфолипиды двух типов - глицерофосфолипиды и сфингофосфолипиды (Николаев А.Я., 2001).

Глицерофосфолипиды являются производными фосфатидной кислоты
(диацилглицеринфосфата).     

Глицерофосфолипиды, представляют собой сложные эфиры глицерина,
высших жирных кислот и фосфорной кислоты.

К основным глицерофосфолипидам относятся:

фосфатидилхолин (Х=- CH₂CH₂N(CH₃)₃);

фосфатидилэтаноламин (Х=- CH₂CH₂NH₂);

фосфатидилсерин (Х=- CH₂CH(NH₂)COOH);

фосфатидилтреонин (Х=- CH(CH₃)CH(NH₂)COOH);

фосфатидилглицерин (Х=- СН₂СН(ОН)СН₂(ОН));

дифосфатидилглицерин               (кардиолипин)

                   ( Х = - CH₂CH(OH)CH₂OPO₂OCH₂CH(OCOR)CH₂OCOR);

Н         НО НН

фосфатидилинозит

          ОН          Н

                                                                                                                                       Н                                          ОН

                                                                                                                                       

                                                                                     (   Х =                                  -     О                                         Н                                      Н

                                                                                                              ОН         ОН                     ОН

В группу сфингофосфолипидов (сфингомиелинов) входят липиды, со-
держащие аминоспирт-сфингозин. Построены сфингофосфолипиды идентично с глицерофосфолипидами.

В них водород гидроксильной группы у первого углеродного
атома церамида замещен на фосфохолин, фосфоэтаноламин или
фосфосерин (Николаев А.Я., 2001).

                                                                                               НО-СН₂                 О

                                                     

                                                                                                                CH-NH-C-R

                                                                

                                                                                                       HO - CH - CH = CH - (CH₂)₁₂ - CH₃
                                                              церамид

здесь R - углеводородный радикал жирной кислоты, которая связана с
аминогруппой сфингозина амидной связью.

         Основная роль фосфолипидов в клетке - быть структурными компо-
нентами мембран (Крейтис М., 1975). По своему химическому строению они относятся к группе так называемых амфифильных соединений, молекулы которых состоят из двух частей, радикальным образом различающихся по своему отношению к водному окружению(Bangham, A.D., 1964). Полярные головы молекул фосфолипидов - гидрофильные, а их неполярные хвосты – гидрофобные (Антонов В.Ф., 1999).

Уникальноестроениеприродных  фосфолипидов,вмолекулах  которыходновременнонаходятся  гидрофобныеигидрофильные фрагменты,предопределяетих  незаменимуюрольво  многихважнейшихбиологических  процессах (Маркин В.С., 1983).В  качествекомпонентовклеточных  мембранфосфолипидыраспространеныво  всехтипахживых  организмов (Barsukov, L. I. , 1977, CevcG, 1996).

Вфундаментальныхи  прикладныхнаучныхисследованиях  используютлипидныемонослойные,  бислойные(«черные»)мембраны,  липосомы.(Fountain, M.W., 1982). Основныенаправления  работвэтой  области-изучение  динамикииподвижности  молекуллипидов,липид-белковыхвзаимодействий,фазовых  переходов,межмембранныхвзаимодействий (Крепс Е.М., 1981).

Широкоеиспользованиелипидов  вмедицине и косметологииосновано  наихвысокой  физиологическойактивности,малой  токсичности,  биосовместимостиибиодеградируемости ( Степанов А.Е., 1991 ;Дудниченко А.С., Краснопольский Ю.М., Швец В.И., 2001).    Благодарясвоим  особымсвойствам,фосфолипиды  ворганизмемогут  выполнятьследующиефункции. Транспортные: фосфолипидныеагрегаты  синкапсулированнымилекарственнымивеществами, а также биологически активными веществами могутцеленаправленнотранспортироватьих  кнужныморганам  итканям.Фосфолипидные  везикулытакжеспособны  удалятьопределенныекомпоненты  изклеточныхмембран,  чтопозволяеткорректироватьтечение  метаболическихпроцессовв  организме.

Регуляторные: отдельные  типыфосфолипидови  ихметаболитыактивно  участвуютвпроцессах  клеточнойрегуляции(Fountain, M.W., 1982).Так,  например, фосфатидилинозиты  определяютфункционированиебиологическогоцикла,  отвечающегозаформирование  информационно-регуляторных  потоковклеткив  ответнавоздействие  экзогенныхфакторов (Швец В.И., 1987).

Иммунологическаяактивность: фосфолипидыпроявляют  адьювантныесвойстваи  поэтомуспособнывлиять  на   иммунныйстатус  организма.Антигенныесвойства  (высокаяиммуногенность)липидов  вызывают,вряде  случаев,формированиев  организмеспецифическихантилипидных  иммуноглобулинов.Выявлениетаких  иммуноглобулиноввстандартных  иммунологическихтестахможет  быть использованодлядиагностики  некоторыхраспространенныхзаболеваний (Иванова Н.Н., 1990; Краснопольский Ю.М., 1999).

Эмульгирующаяспособность:  данноесвойствоопределяется  амфифильнойприродойфосфолипидных  молекулишироко  используетсядлясоздания  биологическиактивныхэмульсий,  вкоторыхлипиды  являютсяглавнымстабилизирующимфактором.

Созданиемедицинских и косметических препаратовнаоснове  липидовоснованона  использованииэтихфункций.  Приэтомнеобходимы  индивидуальныефосфолипиды,либо  ихсмесиконтролируемогосостава,  обладающиекомплексомопределенных  свойств.

Впроизводствелипидных  косметическихсредствиспользуют   способностьфосфолипидов стабилизировать жировые эмульсиииформировать  липосомы (Власов Г.С., Салов В.Ф., Торчилин В.П., 1982).В  липосомальныхкремах,которые  впоследнеевремя  получилиширокоераспространение,липиды  выступаютикак  одноизактивных  действующихначалкомпозиции (Каган В.Е., Скрыпин В.И., Сербинова Е.А., 1986).

Значительныеобъемыпроизводства,  высокиетребованияк  жирно-кислотномусоставуфосфолипидов  делаютактуальнойпроблему  доступностисырьевыхисточников.

Внастоящее  времяосновнымиметодами  производствафосфолипидовявляются  химическийилиферментативныйсинтез  ивыделениефосфолипидов  изприродныхисточников.  Приполученииизотопно -, флуоресцентно - и спин - меченныхфосфолипидов  длянаучныхисследований  наиболеечастоиспользуется  полусинтетическийподход,сочетающий  химическийиферментативныйметоды (Швец В.И., 1997). Дляфармакологическихцелей и косметологии обычноиспользуются  природныефосфолипиды.Значительные  объемыпроизводства,высокие  требованиякжирно-кислотномусоставу  фосфолипидовделаютактуальной  проблемудоступности сырьевых источников. Производятсяфосфолипиды восновном из  желтковкуриныхяиц  илисоевыхбобов,  внебольшихколичествах  используетсятакжедругое  растительноесырьеи  тканиживотных.

Для  контроляотдельныхстадий  впроизводствефосфолипидов  наиболеечастоиспользуют  дваметода:хроматографию  (ТСХ,ВЭЖХ)для  определениякачественногосостава  липидов ианализапродуктов  перекисногоокисления (Лопатин П.В., 1983).

Перекисное окисление липидов – это окисление жирных ненасыщенных кислот молекулярным кислородом (Кучеренко Н.Е, Васильев А.Н., 1985). Этот показатель является одним из основных факторов, вызывающих повреждение биологических мембран и может быть инициировано целым рядом факторов, в том числе и УФ – облучением (Владимиров Ю.А., Арчаков А.И., 1972 ,Poste G., 1976, PosteG., 1978). Основными стадиями этого процесса являются: образование гидроперекисей, циклизация и последующее расщеплениеуглеводородныхцепей с образованием малонового диальдегида, альдегидов и кислот (Владимиров Ю.А., 1989).

Впроцессах перекисного окисления липидовактиватором молекулярного кислорода являются ионы Fе²⁺ . Комплекс Fе²⁺ -аскорбиновая кислота активирует перекисное окисление липидов во всех типах биологических мембран (Мельянцева Л.П., 1995). Инициировать этот процесс могуттакже и другие металлы переменной валентности – Cu, Mn,Co, а   также соединения, способные образовывать свободные радикалы (Кучеренко Н.Е., Васильев А.Н., 1985). Свободным радикалом называют часть молекулы, имеющую на внешнем уровне неспаренный электрон. Для устойчивогосостояния молекула должна содержать на внешней орбитали два электрона, поэтому свободные радикалы активно стремятся отнять недостающий электрон у других молекул. (Удянская И.Л., 2001).

Основной целью нападения свободных радикалов являются фосфолипиды, в состав которых входят жирные ненасыщенные кислоты. При взаимодействии свободных радикалов с молекулой ненасыщенного липида (RН)  происходит образование липидных радикалов (R^*), которые практически мгновенно реагируют с находящимся в среде окисления кислородом, образуя активные гидроперекисные радикалы (RО₂)(Gains N., 1977). Эти радикалы окисляют новые молекулы липидов с образованием липидных гидропероксидов (RООН) и липидных радикалов. Гидропероксиды являются крайне нестойкими соединениями иразлагаются с образованием радикалов RО^* (Николаев А.Я, 2001). Процесс разложения гидропероксидов может происходить как спонтанно, так и с участием ионов железа и меди. Эти радикалы , в свою очередь, окисляют следующую молекулу липида. В результате количество свободных радикалов растет лавинообразно ( Удянская И.Л., 2001):

RН + НО^*® Н₂ О + R^*

R^* + О₂®RО₂^*

RО₂^* + RН® RООН + R^*

RООН ® НО^* + RО^*

RО^*+ RН ® RОН + R^*

Мембраны живых клеток подвергаются окислительномуповреждению в результате радикальной атаки. Перекисное окисление липидов – физиологический процесс, а пероксиды – продукты обмена живых клеток, образующиеся на определенном стационарном уровне (Алавердиева С., 1999).Стационарность обеспечивается за счет физико-химической регуляции окислительных реакций, параметрами которой является атиокислительная активность и состав липидов (Senda,ML, 1979). При этом необходимо учитывать, что невозможно изменить какой либо из параметров системы, не затронув остальные (Аристархов С.А., 1976). В последнее время большое внимание уделяется поиску различных антиоксидантов, особенно из природного сырья, поскольку такие соединения более легко выводятся из организма и являются экологически чистыми (Круглякова К.Е, Шишкина Л.Н., 1992).Внутриклеточная антиоксидантная защитадополняется действием внеклеточных антиоксидантов, которые отвечают за очистку от свободных радикалов, в первую очередь, внеклеточного пространства. Наиболее важными внеклеточными оксидантами является глутатион, витамины Е, А, С, глутатион пероксидаза, супероксоддисмутаза и каталаза( Хертель Б., 2000).

Таким образом, перекисное окисление липидов – важныйпоказатель, определяющийкачество  липидныхпрепаратов,и  оптимизацияметодовопределения  данногопоказателяодна  изактуальныхзадач.

1.2.3. Изучение технологииинкапсулирования в косметике

В  современнойкосметикевсе  большевниманияуделяется  активнымдобавкам-  компонентам,которые,будучи  включеннымиврецептуру  вотносительно небольшом  количестве,могутсущественно  влиятьнасвойства  готовогопродукта-  его   эффективность(например,  противовоспалительные и ранозаживляющие свойства) и качество(химическую    ибиологическуюстабильность,  внешнийвид,сенсорные  свойства) (Кубанов А.А., 1996).В  ролиактивныхдобавок  могутвыступатькак  биологическиактивные(витамины,  незаменимыежирныекислоты,  отбеливающиекомпонентыит.д).;  «технологически»активныесоединения  (консерванты,отдушки,красители,  пигментыит.д.),  такисложные  смеси(например,экстракты  исинергетическиекомпозиции).

К  сожалению,вомногих  случаях,введениеактивных  компонентоввготовую  рецептурулимитируетсяих  химическойприродой:неприятным  запахом,низкойрастворимостью,быстрой  деградациейиз-заокисления,  чувствительностьюкУФ-излучениюили  воде,атакже  плохойпереносимостьюкожей  принанесениив  болеевысокихконцентрациях (Ципоркина И.В., 2002).

При  нанесении накожу     активноесоединениеконтактирует  своздухоми  быстроокисляетсяили  попадаетподпрямые  солнечныелучии  разрушаетсяподих  действием (SweeneyT.M., Downing D.T.. 1997).  Примерамитакихсверхчувствительныхсоединений  являютсяненасыщенныежирные  кислоты,витаминыА  (ретинол)иС  (аскорбиноваякислота).Так  окисляясьпоместу   двойныхсвязей,ненасыщенные  жирныекислотыспособствуют  быстрой порчепродукта(его  прогорканию)(Jagawa, Y., 1971).  Под действиемУФ-лучейвитамин С  утрачиваетсвоиантиоксидантныесвойства,  авитаминА  можетвызватьсильное  раздражениекожи (ArctJ, 2001)..

Инкапсулированиеактивных  компонентов,т.е.заключение  ихвзащитную  оболочку,рассматриваетсякак  перспективноерешениеэтой  проблемы.Чтобывыбрать  оптимальнуюсистемудоставки,  следуеториентироватьсяна  несколькомоментов (KasH.S, 2002):

-  совместимостьсистемыинкапсулированияс  физико-химическими  свойствамиактивногокомпонента;

-  производственныевозможностии  мощности;

-  стоимость;

-  выборсырьевыхкомпонентов  длясистемыдоставки;

- желаемыйразмер  частиц.

Среди  перечисленныхаспектовочень  важнымявляетсявозможность  получения системинкапсулирования  высокогокачествав  промышленноммасштабе (Schreier, H., Boustra, J., 1999). Следующимважным  моментом в технологии инкапсулирования  являетсяпоискинициатора  (триггера) ихвысвобожденияи целевой  доставкиактивногокомпонента  непосредственнокоргану  мишени.Этапроблема  малоисследована.Ясно  одно-в  этойобластинужны  инновацииисвежие  идеи,длятого  чтобывдальнейшем  повыситьбиодоступностьактивных  компонентов.

Сегодня  наиболееперспективными«косметическими»системами  доставкисчитаютсямикрочастицы  (капсулысоструктурой  «ядро/оболочка»,пористыемикрочастицы  иматричныечастицы),  липосомыициклодекстрины.Идея  использованиятехнологиимикрокапсулированияв  косметическомпроизводствепришла  изфармацевтики,в  которойисследованияв  этойобластиведутся  ужеболее40  лет(KasH.S ., 1997).Примером  могутслужитьинъекционные  препаратыдляпарентеральноговведения,  вкоторыхактивное  начало«упаковано»в  капсульныечастицы.Вэтомслучае  концепция«чемменьше,  темлучше»вполне  оправдана,ипоэтому  здесьвкачестве  системдоставкииспользуют  обычнонаночастицыразмером  20-500 нм (Антонов В.Д., 1993). Размер  транспортныхчастицв  косметикенеобязательно  долженбытьстоль  малым.Всмысле  стабилизациичувствительныхактивных  компонентов,большаяплощадь  поверхностималенькихнаночастиц  скореенеблагоприятный,чем  благоприятныйфактор. Главнымизадачамибольшинства  косметическихсистеминкапсулированияявляются  обеспечениемедленноговысвобождения  активныхкомпонентовна  поверхностикожи и их химическаястабилизация,что снижает побочныеэффекты  иповышаетсрок  годностипродукта, а также проникновение черезмембрануклетки.

Микрокапсулыпредставляют собойсферические  системы,вкоторых  активныекомпонентырасполагаются  вядре.Ядро  окруженооднимили  несколькимислоямиоболочки. Основнымиспособами  приготовлениясистем«ядро/оболочка»являются:  методразделенияфаз,  пограничнаяполимерилизация,коацервация  инанесениепокрытия  (оболочки),сиспользованиемпсевдоожиженногослоя.  Насовременномрынке  представленширокийвыбор  материаловдлякапсульных  оболочек.Существуютнатуральные  илисинтетическиеполимеры,  такие,какколлаген,  альгинат,хитозан,полимолочная  кислота,поликапролактам,полиакрилаты,  атакжевоски.  (Tholon L , BrankaJ E, 2000).

Эффективностьмикрокапсул  всоставеготового  продуктавомногом  зависитотих  поведениявкосметической  базе.Материалдля  стенкикапсулынеобходимо  выбиратьсучетом  присутствияврецептуре  другихкомпонентовтаким  образом,чтобы:

-  обеспечитьстабильностьмикрокапсул  впроцессепроизводства  ихранения;

-  облегчитьвысвобождениеинкапсулированныхингредиентов  послеаппликациина  кожу (PfluckerF. С соавт, 2000).

При изучении матричных систем MullerR.с соавт. (2000) установили, что технология матричных систем  базируетсяназахвате  активногоингредиента   внутрь  однородногоматрикса.Активный  компонентможетбыть  растворенилисуспендирован  вматериалематрикса. Простейшимметодом  получениясистемэтого  типаявляетсясушка  прираспылении.Вэтомслучае,  частицыформируютсяпри  испарениирастворителяиз  матричногоматериала(например,  природногоилисинтетическогополимера), содержащегоактивный  компонент. Другойвидматричной  системы, указанный в работах Mullerа R. -твердые  липидныенаночастицы(solid lipidnanoparticles, SLN).  

В  отличиеотмикрокапсул, пористыемикрочастицы (« микрогубки») неимеют оболочки как таковой. Они состоят из натуральных илисинтетических полимеров, таких как коллаген, полиакрилат,  полиметакрилатили полиамид, и обладают огромной внутренней  поверхностью.Микрогубка захватывает активный компонент путем сорбционныхмеханизмов  ивысвобождаетего,  восновном,благодаря  диффузии.Коллагеновыемикрогубки  могутбытьполучены  эмульгированиемиперекрестной  сшивкойснативным  коллагеном.Подобныесистемы  лучшевсегоподходят  длялипофильныхактивных  компонентов,таких,как  витаминА.Абсорбция  витаминаАв  коллагеновуюмикрогубкунеобязательно   повысит  егостабильность,но  увеличитегобиодоступность (RosslerB, 1995).

Микрочастицы имикрогубки   предоставляютразработчику  рецептурширокиевозможности  впланевыбора  сырьевогоматериала, размерачастиц,  триггеравысвобожденияи  методапроизводства,но  их,какправило,  необходимоготовить«ручным»  способом,что требуетвремени  иповышаетстоимость  конечногопродукта.

Еще одним из применяемых на практике способов инкапсулирования являются циклодекстрины (ЦД) -  это олигомерные циклические  соединения,которыеполучают  путемферментациикрахмала  ферментомциклодекстринглюкозилтрансферазой(cyclodextringlycosyltransferase).Впервые  ЦДописалв  своейработеVilliers(1891),ис  этогомоментаони  сталиобъектоминтенсивных  исследований.Чащевсего  используютЦД,состоящие  изшести(α-ЦД),  семи(b-ЦД)  иливосьми (d-ЦД)остатков  глюкозы.Наиболеевыдающимся  свойствомЦДявляется  способностьформироватьмолекулярные  комплексыс«гостевыми»  молекулами.Этосвойство  обусловленоспецифическойструктурой  ЦД-кольца.  Внешняяповерхностьмолекулы  ЦДгидрофильная,что  делаетихрастворимой  вводе, авнутренняя гидрофобная.  В  процессе«загрузки»ЦД  молекулыводывнутри  полостизамещаютсянеполярными  молекулами-«гостями»,  формирующимикомплекссЦД( LoftssonT, 1996).

Внастоящее  времяведутсяработы  поусовершенствованиюЦД-технологий,в  томчисле путем  химическоймодификациии  полученияциклодекстриновых производных. Некоторые из полученных  иисследованныхпроизводных  лучшерастворяютсяв  водепосравнению  сне модифицированными«нативными»  ЦД.

В  медицинеЦД - технологиииспользуются  длятого, чтобыповлиять на растворимость и кинетику высвобождения многихлекарственных агентов. Всешире  становитсяприменениеэтих  технологийвсредствах  бытовойхимиии  личнойгигиены.Так,  «пустые»ЦДиспользуют  дляуничтожениянеприятного  запаханалюбых  поверхностях,включаяодежду,  мусорныеящики,ковровые  покрытияиобои,  атакжекожу  человека.Всоставе  очищающихсредствЦД  способствуютудалениюизбытка  кожногосала,а  вкосметикедляпроизводствадезодорантов. Комплексы ЦДс  некоторымилипидамимогут  бытьиспользованы какэмульгаторы. Втаком  псевдоэмульгаторелипидыпредставляют  гидрофобный«хвост»,а  циклодекстриновыйторус-гидрофильную  «головку» ( FilbryA., 2002).

Высвобождение«гостевой»молекулы  изЦД-комплексапосле  нанесенияпродуктана  кожуобычнозапускается  при испаренииводы,входящей  всоставрецептуры.  Приэтомокружение  комплексаменяетсяс  гидрофильногоналипофильное  имолекула-«гость»может  быть солюбилизирована  липидамикожногосала  илисамогопродукта.  Кроме того,конкурентноезамещение  окружающимилипидамиможет  вноситьсвойвклад  впроцессвысвобождения( BrewsterM. E., 2002).

Успешнаяистория  использованиялипосомв  косметикеначаласьв  1986году,когда  нарынкепоявились  первыелипосомальныекосметические  средства (MargalitR., 1995). В середине 60-х годов английский учёный Алек Бэнгхем, выясняя роль
фосфолипидов в свёртывании крови, изучал структуру коллоидных дисперсий, образующихся при набухании фосфолипидов в избытке воды. На электронных микрофотографиях он увидел слоистые частицы, похожие на мембранные структуры клетки( Tyrrell D.A., 1976 Arnold, J. A, 1985). Липосома-это коллоидная  система,представляющаясобой  замкнутоесферическоеобразование  (везикулу)(Kim, S., Marlin, G., 1981).  Оболочкалипосомысостоит  изамфифильныхсоединений,  формирующихвводной  среденепрерывныйдвухслойный  пласт (Jizomoto H., 1989).  Липосомымогутбыть  однослойными(еслиони  окруженытолькоодним  пластом)илимногослойными  (еслитакихпластов  несколько) (NakagawaX. , 1980, Грегориадис   Г., Аллисон П, 1983, Dijkstra, J. A, 1988). Всестороннее изучение липосом и механизмов их действия позволяет обосновать различные аспекты их использования в биотехнологии и косметологии (Кузякова Л.М., 2000).

Компонентами липосомальных мембран могут являться заряженные
липиды (фосфатидная, дипальмитоилфосфатидная кислоты, фосфатидилсе-
рин, диацетилфосфат или его ацетат, стеариламин, димиристоилфосфатидили-глицерин), стиролы - холестерин и его эфиры, изопреноиды, токоферол,
жирные кислоты, гликолипиды (ганглиозиды и цереброзиды),
а также, при определенных условиях, некоторые белки, диацетиловый
спирт (Кузякова Л.М., Ефременко В.И., 2000).

Благодаря своей специфической структуре липосомы -потенциальныйтранспорт  гидрофильных и липофильных соединений (Olson F., 1979, Eytan, G.'D., 1982). Вероятно,  структурное сходство липосомальной оболочки с биологическимимембранами  всочетаниисо  свойствомбытьдвойным  переносчикомделаетлипосомы  стользаманчивымидля  использованиявкосметике. На  современномрынкекосметическогосырья  имеетсябольшойвыбор  «стройматериалов»,изкоторых  можносделатьлипосомы, - отлипидных  соединенийдонеионогенных  ПАВ.Однаконаибольшей  популярностьюупотребителей  пользуютсялипосомы,построенные  изфосфолипидов,поскольку  этиприродныесоединения  имеютсятакжеи  вкоже(Fountain, M.W. , 1990 Kettenes – vandenBoshJJ, 2000).

Практически40-летняя  историяисследованийи  разработокпоиспользованию  липосомвобласти  косметики,фармацевтикии  биохимииотраженав  огромномколичественаучных  публикаций (SacherM., 2003).Первая  волнаэйфории,связанная  скрасивойидеей  адреснойдоставкиактивных  компонентов прошла, и сегодня исследователи имеютобъективную  картинувозможностейлипосомальных  носителейприих  использованиивмедицине  вцеломи  вкосметикев  частности (StormG., 1998).

Так,  одновремя   липосомы  активноизучалив  качественосителялекарственных  соединенийсцелью  повышенияихбиодоступности,    растворимостии  сниженияпобочныхэффектов.  Другойгорячейтемой  дляисследованийдо  сихпорявляется  целеваядоставкалекарств  спомощьюлипосом.  Ксожалению,коммерческие  примерыиспользованиялипосом  вмедицинскихпрепаратах  вРоссииотсутствуют,  аза рубежом  крайнередкипо  причинемногочисленныхтрудностей,  связанныхсразработкой,  высокойстоимостьюконечного  продукта,сложностямипри  хранениии, чтоособенно  важносточки  зрениямедицинскогоприменения, проблемамивоспроизводимости результатов и неубедительнойстатическойобработкой  данных , а также их стандартизацией (Ефременко В.И., Кузякова Л.М., Умнов А.В., 2001).

В  косметикелипосомыпопулярны,  благодарярядупреимуществ,  посравнениюс  другимитехнологиямиинкапсулирования.Так  производствопустых(незагруженных)липосом  относительнонесложно(Honeywell-Nguyen, P., 2002).  Существуютразныеметоды  ихполученияв  лабораторныхусловиях:экструзия,  обработкаультразвуком,гидратация  тонкойлипиднойпленки  (Kudrin, A.V., 1981, GrommelinD., 1994),методы  «замораживания -оттаивания»и«обращения  фаз» (Кузякова Л.М., 2000).

Липосомы-  оченьгибкиеструктуры,  сточкизрения  ихзагрузкиактивными  компонентами,липофильныесоединения  включаютсявсостав  оболочки,агидрофильные  растворяютсявводной  сердцевине (Gregoriadis, G., 1974,  Fountain, M.W. , 1990, Mauriege, P., 1999). 

Использованиелипосом  вкосметикесильно  ограниченохрупкостьюих  конструкции.Онимогут  бытьразрушенысдвиговыми  силами,действующимив  процессепроизводстваконечного  продукта.Следуетпринять  вовниманиеи  химическуюнестабильность  отдельныхлипосомальныхкомпонентов,  особенноеслидля  построениялипосомыиспользовалисьненасыщенные  фосфолипиды(AshadyR., 1999).  Здесьможетпроизойти  окислениедвойныхсвязей  илигидролизэфирных  связей.Однако,поскольку  сегоднявыборматериала  длямембранылипосом  обширен,этупроблему можно в той или иной степени решить. Утечкаинкапсулированногоматериала  изсердцевинылипосомы  -этодругая проблема,зависящая  вбольшейстепени  отрецептурныхтонкостей  и технологий приготовления (Kettenes – vandenBoshJJ, 2000).

В  последнеедесятилетиеведется  активнаяработапо  созданиюболеестабильных  именеечувствительных к различным компонентамлипосомальных  носителей.Сэтой  цельюиспользуютразличные  добавки,напримертакие,  какхолестерин,холатнатрия,  новыеклассыПАВ,  которыестабилизуют липосомальнуюмембрану (CevcG., 1996). В  качестве стабилизаторов иногда используютнекоторые  заряженныесоединения,которые  создаютполена  поверхностилипосомы.В  этомслучаевсе  липосомыв системестановятся  одинаковозаряженными и отталкиваютсядруг отдруга  (незаряженныелипосомыпри  столкновениимогутсливаться). Ещеодин  вариант стабилизации-введение  влипосомальнуюстенку крупных полимерныхмолекул,  которые образуют на поверхности липосомы своего рода щит, препятствующийсоприкосновениюлипосом  иихслиянию.

1.2.3. Современные тенденциииспользования липосом в косметологии

Первое применение липосом в научных исследованиях было связано с моделированием клеточных мембран. Для исследования различных биохимических реакций и взаимодействий, происходящих в растительных и животных клетках,в качестве биологических моделей  использовали липосомы. (Love, W.G., 1990).В то время гипотеза липидного бислоя, как основного структурного элемента биологических мембран овладела умами исследователей, и необходимы были экспериментальные доказательствасправедливости основных положений этой гипотезы  (Medda, S., 1995). Липосомы, как никакая другая модель идеально подходили для решения этой проблемы. Экспериментальная система «клетка-липосома» представляет важный инструмент для изучения различных аспектов функционирования биологических мембран. Эта тема широко представлена в монографии Л.Б. Марголиса и И.Д. Бергельсона «Липиды и их взаимодействия с клетками» (1986). С помощью липосом были установлены закономерности транспорта веществ через мембрану, а также изучены  взаимодействия клеток и их мембран с различными биологически активными веществами. (Mowri, H.O.Lichtenberg, D.., 1984).

              Изучение проницаемости кожи началось с работ исследователя Homalle, опубликованных в середине 50-х годов ХIХ века.В них было показано, что кожа состоит из нескольких слоев, имеющих разное строение и функции. Homalle впервые заявил о том, что эпидермис гораздо менее проницаем, чем дерма.Чтобы проникнуть внутрь кожи необходимо пройти узкие межклеточные промежутки. Поэтому крупные молекулы (белки, полисахариды) не в состоянии этого сделать. Кроме того, липиды, заполняющие эти промежутки представляют собой гидрофобную среду, не пропускающую водорастворимые соединения. Вместе с тем через липидный барьер легко просачиваются небольшие жирорастворимые молекулы компоненты масел и жиров(Papahadjopoulos, D., 1987). Насыщенные жиры впитываются плохо,смешиваясь с эпидермальными липидами, они делают их более жесткими и менее проницаемыми (Марголина А.А., 2000).Было разработано несколько математических моделей кинетики проникновения различных веществ через роговой слой и их дальнейшего распределения в эпидермисе. (Arct J. et. al., 2001).

Липосомальная косметикадостаточношироко представлена как на зарубежном, так и на Российском рынке. Французская компания Academieразработала новую серию препаратов для коррекции фигуры, в которой проникновение БАД  для похудения обеспечивается улучшенной системой доставки на основе липосомальных технологий – сферулентов, представляющихсобой многослойные липосомы. Научно-исследовательский центр   Швейцарской фирмы Milad ^, Opiz включил в состав многих средств профессиональной косметики липосомы, каксредства для доставки активных компонентов (Марголина, 2001). В Россииодними из известных компаний, производящих транспортные системы для доставки косметических препаратов являются лаборатория «Низар» (г. Москва)иНПО «Пульс» (г.Ставрополь).   Липосомы, которые предлагают использовать в качестве компонентов в косметической промышленности различаются составом липидов иразмером, а также биодобавками. Часто их торговое название созвучно названию фирмы-производителя ( например, ровисомы (Rovi, Германия), драгосомы (Dragoco, Австрия), низасомы («Низар», Россия.) или названию серии продукции « альпосомы изсерия косметики «Альпика» НПО «Пульс», Россия). Но встречаются и другие варианты, например, сферосомы, дермасомы, ниосомы и т.д. (Эрнандес Е., 2001г.).

Липидные везикулы, попав в липидную среду, тут же теряют свою целостность и встраиваются вклетки или в межклеточные липидные пласты (Pick, U. , 1981). ЛипофильныеБАВ вместе с липидами липосом могут диффундировать по межклеточным промежуткам. Липосомы, как очень нестабильные элементы, сохраняют форму при определенных условиях. Быстрая потеря влаги эмульсионным слоем на поверхности кожи приводит к тому, что липосомы начинают разрушаться, высвобождая при этом активные компоненты. Гидрофильные БАВ оказываются в основном под пленкой из липофильных компонентов – там, где есть водная прослойка. Окклюзивный слой способствует улучшению пенетрации водорастворимых соединений. Липосомы имеют плюс и с технологической точки зрения. В них удобно заключать легко окисляемые соединения, что существенно замедляет их деградацию и защищает продукт от преждевременной порчи. Некоторые БАДобладают неприятным запахом, а их инкапсулирование помогает это предотвратить. В 1987 году известные косметические компании создали новый продукт, явившийся плодом усилий их исследовательских лабораторий. Это были липосомальный гель «Каптюр» фирмы «Кристиан Диор» и крем для кожи «Ниосомы» фирмы «Л^, Ореаль». В последующие годы в продаже появилось несколько сот аналогичных продуктов. Почти каждая уважающая себя косметическая фирма считала своим долгом предложить покупателю изделия, изготовленные на основе липосом.И сегодня это, пожалуй, самая перспективная в коммерческом отношении область их практического применения (Барсуков Л.И., 1988).

           С нашей точки зрения, в основе данного  инновационногонаправленияв косметике лежат три обстоятельства. Во-первых, требования для парфюмерно-косметических препаратовявляются значительно менее жесткими, чем длялекарственных препаратов, и поэтому путь таких препаратов от исследовательской лаборатории до потребителя занимает значительно меньшее время и обходится производителю намного дешевле. Во-вторых, для косметических целей пригодны  липосомы, производство которых не требует сложного технологического оборудования и дорогостоящих исходных материалов.И  втретьих,отработка  технологииконструированиястабилизации  истандартизациилипосомальных  косметическихпрепаратовпозволит  перейтикпроизводству  новогопоколениялекарственных  препаратов.

1.3. Тенденции применения растительных масел в производствелипидной  косметической продукции  

В настоящие время активно пропагандируется ограничение жиров в рационе. Автоматически в сознании потребителя это переносится на косметические средства, что способствует росту популярности не жировой косметики (гели, кремы на силиконовой основе). На самом деле, как и в питании, так и в косметике вреден не всякий жир, а избыток насыщенных (твердых) жиров. При этом есть жиры, в которых кожа нуждается, и жиры, которые обязательно должны быть включены в рецептуры  косметических препаратов, так как они содержат в своем составе жизненно важные для организма компоненты.

                 Применение в косметических препаратах находят как полиненасыщенные, жидкие масла, так и твердые, полутвердые масла, а также их гидрогенизаты и продукты их переэтерификации. Ониприменяются в качестве питающих, защитных, транспортных липидных, биоактивных ингредиентов косметических эмульсий, губных помад, масел для детей и принятия ванн, массажных, антицеллюлитных, солнцезащитных препаратов, пережиривающих добавок в гигиеническихмоющих средствах. Такие масла, как касторовое, миндальное, оливковое, подсолнечное, авокадо идр., непосредственно используютсяв  качестве эмолентов. Масла, с высоким содержаниемлауриновой кислоты (кокосовое) широко используются в производстве кускового мыла и ПАВ.Масла используют и в качестве биологически активныхсубстанций (WoollattE. TheManufacturofSoap, 1985).

             Липофильная часть многих амфифильныхингредиентов базируется на растительных маслах. Растительные масла служат сырьевым источником фосфатидов, токоферолов, фитостеринов. Некоторые, как, например, масло виноградных семян и масла из зародышей злаковых, уникальны, так как являются источником благотворно действующих на кожу природных антиоксидантов, фитостеринов, жирных ненасыщенных кислот. Эти вещества дефицитны в кожном жире, особенно у пожилых людей, и их роль в замедлении процессов старения и осуществлении барьерной функции кожи необычайно велика.

Масла бурачника и черной смородины, содержатзначительные количествалинолевой кислоты, масло облепихи содержит фитостерины, токоферолы, сквалеин, полифенолы и другие соединения с регенерирующей, защитной, антиоксидантной и влагоудерживающей функциями (Марголина А.А. и др. , 2002).

                 Линолевая и линоленовая кислоты, содержащиеся в растительном масле – единственно истинно экзогенные, незаменимые жирные кислоты, так как они не синтезируются в организме и должны поступать извне (KantorH.L., 1978). В ходе нескольких ферментативных реакций они превращаются в жирные ненасыщенные кислоты с более длинными углеводородными цепями, а также в тканевые «гормоны» - эйкозаноиды, участвующие в жизнедеятельности организма. Действие накожу  незаменимых жирных кислот представлены двумя механизмами. Во первых, эти кислоты, как и все липиды, могут прямо влиять на структуру межклеточного связующего вещества рогового слоя. А во вторых, они обладают биологической активности за счет метаболитов (Аркт Я., 2001).В различных маслах содержатся неодинаковое количество жирных кислот .

          Сложность состава природного растительного масла требует сочетания нескольких методов исследования, основанных на различных физических и химических принципах (Верещагин А., 1972). Этими методами чаще всего определяют йодной число, число омыления, кислотное число, эфирное число, а также химические константы: число Генера, число Рейхер-Мейсля, число Поленске и другие исследования (Ржехина В., 1967). Физическими методами определяется температура плавления, температура застывания, растворимость и некоторые другие показатели растительныхмасел.

Газохроматографические методы определения жирно-кислотного состава маселпроводят  согласнотребованиямГОСТ 30418-96 «Масла растительные: Метод определения жирно-кислотного состава» и ГОСТ 51483-99 «Масла растительные и животные жиры. Определение методом газовой хроматографиимассовой доли метиловых эфиров индивидуальных жирных кислот к их сумме». Существуют также методики, не указанные в ГОСТах,при помощи которых возможно определение составажирных кислот.Так, хроматография в тонком слое адсорбента эффективна при изучении липидов(Шоль Э., 1965), а  метод ТСХна носителях, содержащих ион серебра, используется для идентификации неизвестных кислот.Он основан на разделении кислот на одинаковые группы по степени ненасыщенности и геометрической конфигурации.Возможностьиспользования колоночной хроматографии для фракционного разделениясоевого и рапсового масел доказанавработе  Hayashi (1993).

                  Популярностью, в настоящее время, пользуется применение комбинированных методов анализа растительных масел. Встречаются методики, посвященные разделению и идентификации жирных природных кислот,сочетающие ГЖХ, капиллярную ГЖХ и ВЭЖХ на обращенных фазах ( C. Blanch, 1998), обратно фазовую ВЭЖХ и масс спектрометрию (Neff, 2001), а также УФ спектроскопию (ультро-фиолетовую).

1.4. Актуальностьконтроля качества и безопасности

парфюмерно-косметической продукции

Историякосметологии освещается в разнообразных изданиях достаточно полно, начиная с доисторического развития человека и заканчивая современностью.Однако,крайне  малопубликаций овозможных опасностях,связанных  снизкимкачеством  даннойпродукции.

1.4.1. Стандартизация, как основа безопасности продукции

          Стандартизация, метрология и сертификация продукции и услуг являются инструментами обеспечениябезопасности и важным аспектоммногогранной коммерческой деятельности. За рубежом уже в начале 80-х годов пришли к выводу, что успех бизнеса определяется, прежде всего, качеством продукции и услуг. В результате анкетирования работников двухсот крупных фирм США80% опрошенных ответили, что качество является основным фактором реализации товара по выгодной цене ( Лившиц И.М.,2004).Проблема качества актуальна для всех стран независимо от зрелости их рыночной экономики. Достаточно вспомнить как в разбитых во второй мировой войне Германии и Японии умелое применение методов стандартизации и метрологии позволило обеспечить высокую конкурентность их продукции и тем самым дать старт обновлению экономики этих стран.

          В настоящее время изготовитель и его торговый посредник, стремящиеся поднять репутацию торговой марки своей продукции и выйти на мировой рынок, заинтересованы в выполнении как обязательных, так и рекомендуемых требований стандарта. В этом смысле стандартизация является частью современной предпринимательской стратегии. Напомним, что стандарт это документ, в котором в целях добровольного многократного использования устанавливаются характеристики продукции, правила осуществленияпроцессов производства, эксплуатации, хранения, перевозки, реализации и утилизации выполненных работ или оказания услуг.

          С развитием человеческого общества непрерывно совершенствовались трудовая деятельность людей, орудия труда и методы производства. В древнем мире уже существовала единая система мер строительных деталей, водопроводных труб и т.д. Первые упоминания о стандартах в России отмечены во времена правления Ивана Грозного, когда были введены для измерения размеров пушечных ядер стандартные калибры – кружала. Петр 1, стремясь к развитию торговли с другими странами, ввел технические условия к качеству отечественных товаров, организовал правительственные бракеражные комиссии в Петербурге и Архангельске. Началом развития стандартизации в нашей стране можно считать введение метрической системы мер и весов, которая была узаконена в 1925 году Постановлением Комитета по стандартизации при Совете Труда и обороны СССР. В 1940 году впервые вводится категория – ГОСТ. В 1993 году принят закон РФ «О стандартизации», который определил меры государственной защиты интересов  Потребителей посредством разработки и применения нормативных документов по стандартизации.

В декабре 2002 года был принят Федеральный закон № 184-ФЗ «О техническом регулировании», который ввел понятие «технического регламента», порядок его разработки,применения и определил структуру государственного контроля и надзора за соблюдением требований технических регламентов. Об актуальности принятия данного закона говорит следующий факт: в начале 2003 года в Нью-Йорке была отозвана из торговых точекпартия российского молока «Можайское» и «Милая Мила», так как в продуктах был обнаружен сульфонамид – вещество, способное вызвать у человека аллергическую реакцию (Лившиц И.М., 2004). Причина – в различии требований национальных стандартов. Хотя российские ГОСТы на пищевые продукты жестче, чем в Америке, но тест на сульфонамид ими не предусмотрен. Приведенный пример иллюстрирует естественный технический барьер,сдерживающий развитие международных экономических отношений.

Главными элементами технического регулирования должны стать:

-установление, применение и исполнение обязательных требований к продукции, работам и услугам;

-установление и применение на добровольной основе  требований к продукции и процессам  жизненного цикла продукции;

-правовое регулирование в области соответствия.             

          Согласно Федеральному закону, технический регламент должен содержать исчерпывающий перечень продукции и процессов производства, эксплуатации, хранения, перевозки и реализации данного вида продукции, а также правила идентификации объекта технического регулирования и минимально необходимые требования, обеспечивающие безопасность продукции и процессов ее производства и реализации. Законом предусмотрено два вида регламентов: общие и специальные. Первые разрабатываютсяпо вопросам пожарной, биологической, экологической и радиационной безопасности. Требования специальных регламентов учитывают технологические и иные особенности отдельных видов продукции и процессов ее производства, хранения и эксплуатации.

          Закон указывает, что основной правовой формой принятия регламента является федеральный закон. Авторы разделяют мнение ряда специалистов  (Горячев А.В.,2003; Пугачев С.В., 2003; Рубцов А.В. и др., 2003 ; Трейер В.В., 2003).о том, что возведение технического регламента в ранг федерального закона необоснованно, так как это резко увеличит время рассмотрения и принятия его Государственной Думой РФ. Было бы целесообразно, чтобы регламент вводился в действие решением Правительства РФ, а выпуск экспериментальных партий новой продукции – решением местных органов власти при непосредственном участии органов стандартизации, что значительно сократит сроки введения их в действие при достаточно высоком качестве.

1.4.2. Проблемы качества и безопасностипарфюмерно-косметической промышленности

Первые упоминания о проблемах качества и безопасности косметических препаратов сделаны еще в1582 г. (Михеева С., 2003). В середине девятнадцатого столетия в России появилось большое количество как иностранных, так и отечественных косметических средств. Практикующие врачи, сталкиваясь с осложнениями после применения этих средств, встали перед необходимостью систематизации и выработки тактики борьбы с их бесконтрольным применением. В 1866 году в Санкт-Петербурге выходит книга доктора В. Ашира «Популярные лекции о косметических средствах и их влияние на организм человека». В своей работе он не только формулирует понятие «косметические средства», но и достаточно четко и обоснованно выражает свою настороженность по поводу качества данной продукции.

Онписал: «Косметическими средствами называют все те вещества, которые употребляются для поддержания и отчасти для сохранения красоты человеческого тела. Безвредны ли они? Обыкновенно все косметические средства делят на две главные группы: на безвредные и вредные.В первую группу войдут те косметики, которые не содержат в себе ядовитых веществ и ежедневноеупотребление  которых не представляет никаких неудобств. Группа косметических средств, которая включает в себя безвредные средства, подвергается довольно часто обманчивым подделкам. Обыкновенно обман заключается в том, что употребляются вещества не тех качеств, каких бы следовало. Подлог заключается обыкновенно в употреблении алкоголя, добытого из крахмала или древесного уксуса, вместо алкоголя и уксусной кислоты, добытой из вина; в замене хороших сортов жира или масла худшими сортами и т.д. Вторая группа будет содержать в себе те средства, которые имеют в основании ядовитые вредные вещества, употребление которых, даже довольно ограниченное, может быть причиной различных ран. Обязанности специалистауказать всем и каждому на те косметические средства, которые содержатвсебе токсические вещества и которых даже редкое употребление может иметь весьма дурные последствия. Следовало бы санитарным властям обязать как фабриканта, так равно и продавца, чтобы они на этикетках своих приготовлений печатали бы все те вредные последствия, которые имеют их приготовления».

В 1888 году в Москве выходит книга доктора медицины М. Боголюбова «Советы по косметике, согласованные с требованиями науки», в которой он пишет  отом, чтоупотребление косметических средств без разбору вредно, особенно  употреблениетехсредств, которые всем известны по названию и никому по составу, не говоря уже о «секретных» косметиках.

Ученые выделяют два «золотых» века в развитии отечественной косметологии: первый был в период с 1909 по 1917 год, а второй с 1959 по 1982 год, после  того, как вопрос косметологической помощи населению перешел в разряд правительственных решений. (Михеева С.,  2003). Однако, не поставленная в свое время точка в отношении косметологии как клинической дисциплины и отсутствие  программв медицинскихинститутах по  специальности врача-косметолога, породило множество ошибок и недоразумений в организации косметической службы, этот процесс усилился после распада СССР. Этот факт отбросил далеко назад достижения отечественной косметологии.

Современные производители косметики используютразличные нормативные документы по качеству и безопасности в основном периода СССР, не вникая в их юридическую и практическую суть, в результате чего возникают серьезные проблемы ипоследствиянизкого  качествастольшироко  применяемойпродукции. Проблема стабилизации и последующего развития экономики неразрывно связана с вопросами повышения конкурентоспособности предприятий, насыщения рынка товарами высокого качества. В своем послании к Федеральному собранию Президент Российской Федерации В.В. Путин обратил внимание  депутатовна серьезное отставание конкурентоспособности нашей продукции. По мнению зарубежных и отечественных специалистов по управлению,  конкурентоспособность продукции на 70-80% зависит от ее качества. В подтверждении этого вывода следует заметить, что неценовые методы конкуренции, в которых основное внимание уделяется обеспечению рыночной новизны и повышению качества продукции, на современном этапе становятся преобладающими намировых рынках. (Горболенко Е.А.,Коровкин И.А. , 2000).

Анализ успешной экономической деятельности ведущих зарубежных парфюмерно-косметических фирм в условиях жесточайшей конкуренции и борьбы за потребителя показал, что все они достигли успеха благодаря продуманной целенаправленной работе в области качества, создания и внедрения эффективных систем менеджмента качества, отвечающих требованиям международных стандартов ИСО серии 9000. Эти системы позволили им реально запустить процесс непрерывного улучшения качества продукции,вовлечь в него весь персонал предприятия ( Маяцкая Т.В., 2003).

По данным ИСО в  2000 году в 150 странах мира функционируют408631 предприятие, имеющее сертификаты соответствиясогласно ИСО 9001, ИСР 9002-  в 158 странах. Распределение предприятий  смеждународнымсертификатом  качествапо регионам выглядит следующим образом: Европа-53,8%, Ближний Восток и Западная Азия-20,05%, Северная Америка-11,82%, Австралия и Новая Зеландия-6,68%, Африка и Западная Аия-4,94%, Центральная Америка-2,64%. Наибольшее количество сертифицированных компаний находится в Великобритании, Германии и США. В настоящее время в Россиизарегистрировано   менее  1000предприятий,имеющих  сертификаты   на системы качества. (Сергеев А.Г., Латышев М.В., Тегеря В.В., 2001).

Развитие международной торговли обусловило необходимость согласования требований к качеству продукции, оптимизацииметодов и правил оценки ее качества. А расширение научно-технических связей между странами потребовало установления стандартных единых определений, терминов и обозначений.Основной задачей центровГосстандарта  России является коренное улучшение качества продукции, какосновного  пути повышения эффективности производства, снижения себестоимости, экономии денежных и материальных затрат. В  1968годув  Россииутвержден комплекс стандартов "Государственная система стандартизации" (ГОСТ 1-68),в  котором регламентированы вопросы, касающиеся планирования работ по стандартизации, порядка разработки и внедрения стандартов, контроля за их соблюдением. ( Сорина И.М., 1990г.).    Установлены следующие категории НТД: ГОСТ; ОСТ; РСТ; ТУ - технические условия. ГОСТ - высшая форма нормативно-технических документов, ОСТы, РСТ и ТУ не должны им противоречить. Стандарты и технические условия подвергаются научно-технической и правовой экспертизе, которая обеспечивает соблюдение законности при ихразработке и утверждении (Брославский Л.И., 1987г.). В последнее десятилетие ТУ разрабатываются иутверждаютсясамими производителями, но при этом они должны быть зарегистрированы в  региональныхорганах Госсанэпиднадзора и Госстандарта России.

В настоящее время качество и безопасностьпродукции, ее конкурентоспособность связаны с сертификацией, что служит определенной гарантией того, что производимая   продукция соответствует требованиям НД. Сертификация способствует внедрению на предприятиях-изготовителяхметодов  контроля, обеспечивающих качество произведенного товара. Она содействует развитию испытательных центрови позволяет получить ощутимый экономический эффект отреализации  высококачественнойпродукции. Следует, однако, отметить, что методы стандартизации и сертификации часто несоответствуют темпам интенсификации производства. В связи с этим возрастает потребность в совершенствовании методов анализа, появляется потребность в повышении квалификации специалистов в области стандартизации.

1.4.3. Современное состояние стандартизации и оценка безопасности  парфюмерно-косметической продукции

Качество косметической продукции сегодня необходимо рассматривать какрезультат рыночной политики самого предприятия, так как именно производитель отвечает за качество своего продукта.

          За последние 4 года в России было забраковано 12%  косметической продукции, представленной в органы стандартизации и сертификации (Вилкова С.А., 2003). 22,7% отрицательных результатов зафиксировано при микробиологических исследованиях. Авторы считают, что возможно, причиной этого стали несоответствующие санитарно- гигиенические условия на производстве, неэффективные консерванты или неверно установленные сроки хранения сырья. Известно, что установление сроков годности сырья по сертификатам и тарным этикеткам, как правило, никем не контролируется ( Баранникова О., 2002). Наш опыт показывает, что даже в случае применения в ходе технологического процесса эффективных консервантовможет наблюдатьсяизменение органолептических свойств продукции в контрольных образцах. В настоящее время сам изготовитель определяет данные сроки. И, к сожалению, они не всегда  реально соответствуют срокам установленным НД. Следует отметить, что отсутствиеутвержденной методики по установлению сроков годности продукции усугубляет данную ситуацию.

          Минздравом России разработаны и действуют методические указания по гигиенической оценке сроков годностипищевых продуктов. Госстандарт РФ рекомендовал (письмо № 330-8/1504 от 30 июля 2001 года) использоватьосновной порядок оценки сроков годностипищевых продуктов при определении периода хранения косметической продукции. Однако сама методика требует уточнений, введения в нее способов ускоренного старения. При разработке технических регламентов, с нашей точки зрения, необходимо включить подтверждение сроков годностипарфюмерно-косметической продукции в число обязательных требований.

          По мнению отдельных ученых (Вилкова С.А., 2003) оценка качества парфюмерной продукции отличается от оценки ее безопасности, как по процедурам, так и по применяемым методам. Авторы не могут согласиться с этим утверждением, так каксам процесс контроля качества и используемые для этой цели методы служат именно для обеспечения безопасности здоровья и жизни человека. Известно, что безопасность косметической продукции зависит от состава и качества сырья, вспомогательных материалов, соблюдения технологических параметров в ходе проведения производственного процесса, условий хранения, транспортировки и реализации продукции. Номенклатура показателей безопасности данной продукции и методы их определения регламентированы требованиями СанПиН 1.2.681-97 и нормативной документацией производителя.

          Методы контроля качества парфюмерно-косметической продукции можно разделить на два класса: объективные и субъективные. К первым относятся физико-химические, микробиологические и токсикологические методы анализа. Ко вторым – органолептические, доклинические и клинические испытания. В настоящее время в соответствии с Федеральным законом «О техническом регулировании» разрабатывается технический регламент, в который войдут показатели безопасности, содержащиеся в различных нормативных документах ( Аронов И.З.,Версан В.Г.,2003; Рахманов М.Л., 2003).

          В результате анализа методов, применяемых для оценки показателей качества парфюмерной продукции, проведена их классификация ( рис.1).

МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОКАЗАТЕЛЕЙ КАЧЕСТВА

                                    

ОБЪЕКТИВНЫЕ                                                              СУБЪЕКТИВНЫЕ

Регистра- ционные

Измери- тельные

Органолеп- тические

Практи- ческие

Эксперт- ные

Социоло- гические

                       

                  

физико-in vivo    in vitro                       in vivo

химические

                              измерение                 оценка              оценка

                             приборами               пробантами         экспертами

Рисунок 1 -Классификация методов определения показателей качества косметических товаров         (Вилкова С.А., 2000).

Экспертным считают метод получения характеристик продукции, основанный на анализеспециалистов – косметологов, дерматологов, парикмахеров или специалистов по сертификации. Оценка экспертов может выражаться в количественной или качественной форме. Практический метод основан на проведении испытаний с помощью лабораторных животных или группы добровольцев – волонтеров, а также специалистов в течение определенного времени. Однако для определения большинства показателей такие методы еще не разработаны.

                   Многие методы оценки качества invivo часто не дают количественных характеристик. Они сводятся к внешнему анализу состояния кожного покрова или волоспри применении двух аналогичных средствили контрольных образцов. Использование одновременно практического и экспертного методов позволяет повысить достоверность и объективность результатов исследований.

          К преимуществам измерительного метода invivo необходимо отнести большую точность и достоверность результатов, которые выражены количественно. Но при этом предприятие несет значительные финансовые затраты.         Изготовители парфюмерно-косметической продукции при разработке технических условий на новые товары стремятся, как правило, уменьшить количество регламентируемых показателей качества. Вследствие чего на рынок поступает масса фальсифицированных и низкокачественных товаров широкого потребления.

В ряде стран существуют организации, контролирующие допустимость использования различных компонентов в косметические средства.В странах Европейского Союза контроль за использованием консервантов определен Директивой 76768ЕЕС, принятой в 2000г. Существует такназываемый «белый список» веществ, разрешенных к использованию в косметике, который постоянно обновляется. В Бразилии был принят примерно в то же время похожий список. Существует список ингредиентов в США, которые разрешены к использованию в косметических средствах. Этот список опубликован в Международном словаре косметических ингредиентов, изданномСТFA (Ассоциация косметических, парфюмерных товаров и отдушек).  В Японииимеются два официальных источникаинформации о составе косметических средств : JSCI ( Японские стандарты косметических ингредиентов) иCLS (Разъяснительные стандарты косметических средств для лицензирования). JSCI был опубликован в 2001 году  Министерством здравоохранения Японии. CLS содержит информацию о том, в какой категории косметическихпродуктов ( всего 11 категорий) могут использоваться конкретные косметические ингредиенты (Баранникова О., 2002).

          При оценки биологической активности и качества новых видов косметической продукции существует ряд проблем :

-   определение номенклатуры оцениваемых показателей качества;

- разработка новых показателей для подтверждения эффективности продукции ;

-   разработка новых методов контроля качества ;

-сравнительная оценка конкурентоспособности и потребительских свойствнового товара.

Успешное разрешение данных проблем возможно при условии создания системы управления качеством на производстве.

1.4.4. Система управления качеством производства косметической продукции

Долголетний опыт борьбы за качество в нашей стране и за рубежом показал, что никакие эпизодические, разрозненные мероприятия не могут обеспечить устойчивое улучшение качества. Эта проблема может быть решена только на основе четкой системы постоянно действующих мероприятий. На современном этапе принята система, установленная в международных стандартах – ИСО серии 9000. Фундаментальным понятием в данной системе является понятие жизненного цикла продукции, как совокупности  взаимосвязанных процессов изменения состояния продукции при еесоздании и использовании (Брюханов В.А., 1996). Разработана модель обеспечения качества в виде непрерывнойокружности, составляющими которой служат отдельные этапы жизненного цикла ( рисунок 2).

                                                      1. маркетинг

11.утилизация                                                              2. проектирование и закупка      

10. послепродажная                                                      3.закупки

деятельность                                              т                    4.производство

9. техническое                                                                5.проверка      

обслуживание

8. эксплуатация                                                              6. упаковка и хранение

                                                         7. реализация  

Рисунок2 -Модель жизненного цикла продукции (Лившиц И.М., 2004)

Эту модель раньше называли «петлей качества», а в последней версии ИСО 9000 – процессами жизненного цикла продукции. Важнейшее требование к системесостоит в том, что управление качеством должно охватывать все этапы цикла. На этапе маркетинговых исследованийосуществляется систематическая работа по изучению рынков сбыта, возможности поставки качественного сырья и вспомогательных материалов. На этапе проектирования и разработки новых видов продукции, выявленные по результатам маркетингапотребительские требования трансформируются вконструкторскую и технологическую документацию, экспериментальный образец. В процессе закупок предприятие оценивает и выбирает поставщиков. В процессе производстваосуществляется подготовка и обеспечение технологического процесса  изготовленияпродукции, отработка и проверка параметров технологического процесса и овладения практическими приемами изготовления продукции со стабильными значениями показателейв заданном объеме выпуска.

Проверка продукции включает в себя контроль, измерения и испытания, осуществляемые на всех этапах цикла. Заключительным этапом проверки является приемочный контроль, по результатам которого проводится стандартизация готового продукта. Распределение и реализация заключаются в закупке продукции оптовыми организациями с целью осуществления отпуска розничными организациями товаров покупателям. На этом этапе субъектом управления качеством становится персонал организации сферы услуг.

На этапе эксплуатации к управлению подключается потребитель продукции. От того, насколько грамотно он будет использовать продукцию, зависит срок ее службы. На стадии утилизации разрабатываются мероприятия по охране  окружающей среды. Но на этом не заканчивается деятельность организации. Она начинает изучать потребности рынка, проводит маркетинговые исследования и приступает к разработке новой продукции. Так возникает новый витокдеятельности   в области качества – от этапа маркетинга до этапа утилизации.

Современная система основывается на двух подходах: технологическом и управленческом (Парций Я.Е., 2003). Первый предусматривает использование эффективных методов для оценки стабильности производственных процессов, обеспечения достоверности результатов измерений, контроля и испытаний продукции. Второйподход базируется на требованиях стандартов ИСО серии 9000, принципах и методах менеджмента.

Эффективная работа предприятия возможна только при умелом сочетании обоих подходов. Необходимость фиксации управленческих решений существует в любом аппарате – от высших органов государственной власти до небольших коммерческих организаций. К управленческой документации относятся организационно-распорядительная, внешнеторговая, отчетно-статистическая, бухгалтерско-финансовая и другие ее  разновидности (Алешин Б.С., 2002). Особый статус среди данной документации имеет организационно-распорядительная, так как именно с ее помощьюосуществляется четкое управление работой всего предприятия. Требования к ней установлены ГОСТом 6.38.

В последние годы в мире стремительно растет число компаний, сертифицировавших свои системыкачества на соответствие стандартам ИСО серии 9000. В настоящее время эти стандарты применяют более 150 стран. По данным Регистра Ллойда, предприятияимеющие международные сертификаты, работают в 2-3 раза эффективнее по сравнению с остальными ( Лившиц И.М., 2003). Тенденция стремительного роста систем управления качеством связана как с внешними, так и с внутренними причинами.

К важным внешним причинам следует отнеститот факт, что многие зарубежные органы и системы сертификации  включаютналичие системы управления качеством в обязательные условия сертификации. Так, в ЕС семь из одиннадцати действующих директив  обязательной сертификации предусматривают наличие данной системы.

Как показывает анализ международного рынка, продукция имеющая сертификат ИСО 9000, имеет цену в среднем в 1,5-2 раза выше, чем аналогичная продукция не прошедшая данную процедуру. Это связано с рейтингом безопасности данного товара. Кроме того, предприятия, имеющие данный сертификат, могут претендовать на льготное кредитование и победу в различных тендерах. При возникновении судебных исков, связанных с браком продукции, наличие данного сертификата расценивается судом как доказательство невиновности (Тимко В.Я., Панкина Г.В.,2000).

К внутренним причинам, побуждающим предприятие к созданию системы управления качеством, следует отнести уменьшение числа проверок со стороны надзорных органов и связанное с этимсокращение издержек производства.

Таким образом, создание системы управления качеством на производстве парфюмерно-косметической продукции позволяют оптимизировать научно-методические основы мониторинга косметической продукции в соответствии с требованиями международного стандарта ИСО 9000. Внедрение данной системы в производство имеет социальный и экономический аспекты, так как обеспечивает выпуск безопасной высококачественной продукции и увеличивает конкурентоспособность предприятия.

Авторами не встречено исследований, касающихся обоснования процентного соотношения входящих в фитокомпозицию лекарственных трав, о сохранении синергизма действия в зависимости от количественного содержания компонентов в композиции.Поэтому представляло интерес изучить возможность подбора количественного соотношения лекарственного растительного сырья с помощью биомоделирования. Решению этих проблем и посвящены настоящие исследования.

Перспективным и недостаточно исследованным направлением, исходя из проанализированных литературных данных, являются: экспериментальный подбор лекарственных растений в композицию, сохраняющую, с одной стороны, индивидуальные качества БАВ растений, а с другой стороны - синергизм действия фитокомплекса; наличие искомого терапевтического эффекта. Вместе с тем, с нашей точки зрения, недостаточно освещены вопросы биотехнологии с точки зрения экспериментальной оценки биологической активности и безопасности разрабатываемого средства, что имеет важный социальный аспект, так как каждый человек в течение всей своей жизни ежедневно пользуется различными парфюмерно-косметическими средствами. Об актуальности поиска универсальной биологической модели для оценки токсичности различных соединений свидетельствует значительное число публикаций. 

Разработкабиотехнологии эффективных липидных тоников для проблемной кожи способствует импортозамещению на отечественном рынке.

ГЛАВА 2. Материалыи методы исследования

2.1.Характеристика материалов, вспомогательных веществ и оборудования, применяемых в исследованиях

1. Сырье:

Фитокомпозиция лекарственных растений :

- цветки и трава зверобоя, соответствовали требованиям ФС 42-1754-81;

- листья крапивы, соответствующие требованиям ГФ;

- цветки календулы, соответствовали требованиям ВФС 42-1868-88

- цветки ромашки, соответствовали требованиям ГФ;

- листья шалфея, соответствовали требованиям ВФС 42-946-80.

- Масла эфирноелавандовое и  розовое   соответствующие требованием СаНПиН 1.2.681-97, характерно наличие ароматического запаха.           

- Глицерин косметический, выпускающийся в соответствии с требованиями ГОСТ 6824-76- бесцветная маслянистая жидкость, смешивается с водой, гигроскопичен.  

- Кислота лимоннаяпорошкообразная, выпускающаяся по ФС 42-0008-00, ГФ ХI. , представляющая собой белые кристаллы.                                                                                                                                    

- Спирт этиловый  ректифицированный ГОСТ 5962-67.

- Бензоат натрия, белый порошок или гранулы, НД 42-9900-99, производства фирмы Берингер Ингельхайм КГ, Германия                                                                                                                                                                                                           

         - Дистиллированная вода, выпускающаяся по ГОСТ   6709.                                                     

        - Родниковая слабоминерализованная вода, соответствующая требованиям СаН ПиН 2.3.2.1078-01.

- Масло растительное подсолнечное , соответствующее требованиям ГОСТ 1129-93, со свойственным подсолнечному маслу цвету и запаху, без привкуса горечи.

2. Вещества, применяемые в методах контроля:

      Ацетилен, соответствующий требованиямГОСТ 5457, газообразныйв баллонах.

Аммиак водный, х.ч., соответствующий требованиям ГОСТ 3760, раствор с массовой долей 5%

           Изоамиловый эфир уксусной кислоты (изопентилацетат), выпускающийся по ТУ 6-09-1240

      Кадмий металлический, ч.д.а, выпускающийсяпо ГОСТ 1125.

      Цинк гранулированный, ч.д.а. по ТУ 6-09-5294 или цинк окись, х.ч. по ГОСТ 10262.

      Свинец азотнокислый, х.ч., выпускающийсяпо ГОСТ 4236.

      Соль закиси железа и аммония двойная сернокислая (соль Мора), х.ч. по ГОСТ 4208.

       Медь сернокислая, х.ч., выпускающаясяпо ГОСТ 4165.

       Кислота азотная, выпускающаясяпо ГОСТ 11125, ос.ч. или другой квалификации перегнанная; раствор в бидистиллированной воде (1:1) по объему и раствор с массовой долей 1%.

        Кислота соляная, выпускающаясяпо ГОСТ 14261, ос.ч. или другой квалификации, перегнанная; раствор в бидистиллированной воде (1:1) по объему и раствор массовой долей 1%.

Калий йодистый – порошкообразный по ГОСТ9678

Метанол, выпускающийся по ГОСТ 6995 77, прозрачная жидкость с характерным запахом спирта.

Агар Хоттингера: мясопептонный бульон с содержанием 120-140 мг аминного азота, 15 г агара, 3 г натрия фосфата двузамещенного. ГОСТ 10444.

Среда Эндо:  мясопептонный бульон, лактоза, индикатор.По МУК 4.2.671

Оборудование и химическая посуда:

Компрессор воздушный, соответствующий требованиям технической инструкции для спектрофотометра. Баллоны со сжатым воздухом.

      Баллоны с ацетиленомгазообразным техническим по ГОСТ 5457 в;

     Весы лабораторные общего назначения с метрологическими характеристиками по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания 200г не ниже 2-го класса точности.

     Весы лабораторные общего назначения с метрологическими характеристиками по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания 500г 4-го класса точности.

       Бюретка 1-1-2-50-0,1 по ГОСТ 29169.

      Колбы мерные 2-25-2,2-50-2,2-100-2 и 2-1000-2 по ГОСТ 1770.

       Пипетки 2-1-2-1 или 1-1-2-1, 2-1-2-2 или 1-1-2-2, 1-2-2-5 и 1-2-2-10 по ГОСТ 29169.

      Цилиндры мерные 1-25 или 3-25, 1-50 или 3-50 по ГОСТ 1770.

      Стаканы Н-1-100 или Н-1-150 по ГОСТ 25336.

      Воронки делительные ВД-1-100 или ВД-1-250 по ГОСТ 25336.

      Пробирки со шлифом П-4-5-1423 или П-4-10-1423 по ГОСТ 25336.

      Капельница по ГОСТ 25336.

      Воронки лабораторные по ГОСТ 25336.

      Фильтры бумажные обеззоленные диаметром 7 или 9 см по ТУ 6-09-1678.

Термометры стеклянные жидкие (не ртутные), диапазон измерения (0-100) С, цена деления шкалы 1⁰ С по ГОСТ 9177-74.

Термостат, позволяющий поддерживать температуру (15-55) ⁰ С, с отклонением от заданной температуры ± 1⁰ С.

Шкаф сушильный лабораторный, произведенный по ГОСТ 7365-55.

Спектрометр атомно-адсорбционный, определяющий наличие металлов в исследуемых образцах.

Альфа радиометр, регистрирующий альфа-излучение в воде.

Бетта - и гамма- спектрометр с программным обеспечением «Прогресс», регистрирующий радиационную активность.

Хроматограф газовый лабораторный с пламенно-ионизационным детектором и программированием температуры, термостатом на температуры не ниже 200⁰ , с испарителем температуры не ниже 300⁰

3. Биологические модели:

- при изучении бактерицидного и/или бактериостатического действия веществ использовали референтный штамм Staphylococcusaureus 209 P.

- в опытах по изучению гистологических и фармакологических характеристик эффективности действия сконструированного липосомального лечебно-профилактического средства использовали нелинейных белых крыс самок массой до 200 г. из питомников Пятигорской фармацевтической академии.

2.2. Методы исследования

Органолептические и токсикологические методы стандартизации

(субъективные)

К органолептическим методам относят установление внешнего вида, запаха, а также при возможности и вкуса исследуемого объекта. Данным  испытаниям на соответствие нормативной документации подвергалось как сырье, так и готовые косметические изделия.

Токсикологические показатели, кожно – раздражающее, кожно – резорбтивное и сенсибилизирующее действие косметического средства определяли согласно требованиям СанПиН 1.2.681-97 и Инструкции по экспериментально-клинической апробации (1986г.).

Физико-химические методы стандартизации

(объективные)

Определение содержания радионуклидов в растительном лекарственном сырье

Исследования проводили в соответствии требованиями ОФС 42-001-03.

Определение цезия-137 при экспонировании счетного образца 1800спроводили с использованием аттестованной геометрии – сосуда Маринелли объемом 1 л. Предварительно сырье измельчалидо размера частиц менее 7 мм. Анализ на содержание стронция-90проводили ваттестованной геометрии – кювете. Лекарственные травы измельчали до фракции «порошок», проходящей сквозь сито с отверстиями 1мм.

Для определения удельной активностицезия-137использовали гамма-спектрометр, имеющий сцинтиляционный детектор, находящийся в свинцовой камере, с толщиной стен более 50 мм. Измерение  удельной активности стронция-90  проводили на бетта-спектрометре, установленном в свинцовой камере. Перед измерением проводиликонцентрирование исследуемого объекта. При регистрации результатов использовалипрограммное  обеспечения «Прогресс».

          Радиационные измерения готовой продукции проводили аналогичными методами.

Исследование радиационной активности воды из природного родника       г. Ставрополя

                Радиационная безопасность воды определялась ее соответствию нормативам попоказателям общей a - и b- активности Сан Пин2.3.2. 1078-01с дополнениями и изменениями   № 2.

              Измерение общей a - радиоактивностипроводили по методике с применением «толстослойных» счетных образцов, приготовленных из водыпутем выпаривания. Выпаренные образцы измеряли на Альфа радиометре с использованием программно-аппаратурного комплекса «Прогресс». Сущность методики заключается в регистрации альфа излучения, испускаемого веществом счетного образца, с последующей обработкой зарегистрированных импульсов на компьютере.  Измерение бета радиоактивности проводили на Бета радиометре также с использованием программно-аппаратурного комплекса «Прогресс», регистрирующем бета излучения.

          При измерении   счетного образца на Альфа радиометре значение суммарной удельной активности альфа излучающих радионуклидов определяли из выражения (МИ 2707-2001):

                                                   А _уд    =S-F                          

                                                                      S _i    ^ТЛР _iК_i            (1),

где А _{уд    -} суммарная удельная активность альфа излучающих радионуклидов в счетном образце;

S -скорость счета импульсов при измерении счетного образца;

F -фоновая скорость счета;

К_i – предполагаемый относительный вклад радионуклидов с энергией альфа частицЕ_iв суммарную активность альфа излучающих радионуклидов в данном счетном образце.

В соответствии с этим                  S_i   К_i= 1      (2)

   ^ТЛР _I- значение эффективности регистрации излучения частиц с энергией Е_i

                                   Е_i- Е_g                

                                                ^ТЛР _I = ^ТЛР ₀    х    Е₀ – Е_g                        (3),

гдеЕ_{g      -}     нижний энергетический порог регистрации частиц радиометром;

Е₀ – энергия альфа частиц в образцовом градуировочном «толстослойном» источнике известной удельной активности(образце сравнения).

                                                                       S₀ - F

                         ^ТЛР ₀     =                     ^ТЛА _0,уд                          (4) ,

Здесь^ТЛА _0,уд      - удельная эффективность альфа- излучающего радионуклида в образце сравнения;

F – фоновая скорость счета.

Суммарную бета активность измеряли на бета спектрометре также с использованием программно-аппаратурного комплекса «Прогресс», регистрирующем бета излучения.

Измерение массовой доли металлов в сырье и готовой продукции

         Для установления массового содержания металлов в сырье и готовой продукции применяли атомно-адсорбционный спектрофотометр, укомплектованный горелкой для воздушно-ацетиленового пламени корректором фонового поглощения и источниками резонансного излучения свинца, кадмия, цинка, меди, железа (лампами с полым катодом, безэлектродными разрядными лампами или другими равноценными источниками). Допускается применение спектрофотометра без корректора фонового поглощения при условии проведения экстракционного концентрирования.

Метод основан на деструкции органической основыминерализацией,

последующем растворении в водных растворах кислот и поглощении света свободными атомами химических элементов. На спектрофотометре измеряется оптическая плотность, прямо пропорциональная концентрации элемента в пробе .

Определение количества липидов в лекарственных травах

Количество липидов в 1 мл экстракта определяли по следующей формуле:

                                                 М = М₂-М₁                   (5),

                                                             V

где М – масса липидов в 1 мл в мг;

М₂ -масса колбы с сухим остатком фосфолипидов в мг;

М₁ – масса пустой колбы в мг;

V – объем раствора фосфолипидов, взятого в опыте в мл.

Сущность метода заключается в определенииколичества липидов по весу сухого остатка после удаления  органической фазы.

Биологические методы исследования

Микробиологические исследования санитарного состояния производственных помещений и оборудования, сырья и готовой продукции

Так как при санитарной обработке помещений и оборудования были использованы дезинфицирующие растворы, содержащие хлор, то необходимо также производить контроль на полноту споласкивания от остатков хлора. Для этого в коническую колбу вносят 0,5 гхимически чистого йодистого калия, растворяют его в 1-2 мл дистиллированной воды, затем туда же прибавляют буферный раствор в количестве, равном полуторной величине щелочности воды, после чего прибавляют 100 мл испытуемой воды.

                При малом содержании активного хлора берут для титрования больше объема воды. Выделившийся йод оттитровывают  тиосульфатом натрия, прибавляя его  из микробюретки до слабо- желтоватого окрашивания, затем прибавляют 1 мл раствора крахмала и жидкость дотитровывают тиосульфатом натрия до обесцвечивания. Расчет проводят по формуле:

                                                     Х=п*0,177*100

                                                                   V                   (6),

где Х – содержание хлора, мгл;

п – количество мл раствора тиосульфата натрия;

V – объем взятой для определения воды, мл.

                 Смывы для контроляКМАФАнМ (кое/см²) с оборудования берут стерильным тампоном с поверхности 10*10 см. После протирания тампон помещают в банку, колбу или пробирку с определенным количеством стерильной водопроводной воды, выдерживают его в воде не менее 10 мин, энергично перемешивают тампоном в пробирке и пипеткой высевают 1 с м³

Количество микроорганизмов вычисляют по формуле:

                                                                Х= А*Б              (7),

                                                                         В

где Х – число микроорганизмов на 1 см² поверхности;

А – число колоний, выросших на питательной среде в чашке;

Б – количество воды, находящейся в банке или пробирке;

В – площадь ограничения    поверхности.

Общее количество проб при контрольных исследованиях одного маршрута мойки должно составлять не менее трех.

Микробиологический контроль родниковой воды

Определение общего количества бактерий в исследуемойминерализованной воде проведено согласно требованиям ГОСТ 18963-73. Сущность метода заключается в определении в 1см³ воды общего содержания мезофильных, мезотропных аэробов и факультативных анаэробов, способных расти на питательной средепри температуре (37± 0,5)⁰в течении 24±2ч, образуя колонии, видимыепри увеличении в 2-5 раз.   Из каждой пробы делали посев не менее двух различных объемов, выбранных с таким расчетом, чтобы начашках выросло от 30 до 300 колоний. После внесения воды в чашки Петри ее заливали 10-12  мл остуженного питательного агара. И отставляли чашки до застывания среды. Затем, когда среда застыла, чашки с посевами помещали в термостат.     Подсчитывали 20 квадратов, площадью 1см²    каждый в разных местах чашки, после чего выводили среднее арифметическое число колоний на 1см², величину которого умножают на площадь чашки, вычисленную по формуле:

                                                               S = r ²Х   p.    (8).

               

        Приопределении количества бактерий группы кишечная палочка согласно требованиям ГОСТ 18963-73 учитывалось, что к группе кишечных палочек относят грамотрицательные, не образующие спор палочки, сбраживающие лактозу с образованием кислоты и газа при (37± 0,5)⁰С в течении 24 часов и не обладающие оксидазной активностью. Количество бактерий группы кишечной палочки определяют методом мембранных фильтров и бродильным методом.

          Мы применяли бродильный метод, так как  при его выполнении не требуется закупка дорогих реактивов. Уже на начальной стадии анализа можно судить о наличии микробной загрязненности. Сущность методики заключается в посеве  на питательные среды определенных объемов анализируемой воды, и подращивании бактерий при (37± 0,5)⁰С в средах накопления с последующим высевом бактерий на плотную среду Эндо, дифференцировании выросших бактерий и определении наиболее вероятного числа бактерий в 1 мл воды. Воду помещают в пробирки с глюкозопептонной смесью и индикатором, снабженные поплавками, а затем инкубируют в течение 24 ч.В  результате анализов в пробиркахс посевами отсутствовало помутнение и образования кислоты и газа, что позволило сделать вывод об отсутствии бактерий в исследованном объеме воды.

      Исследования воды на наличие Pseudomonasaeruginosaсостоит из 3-х этапов: 1) накопление в жидкой среде обогащения; 2) выделение на плотной селективно- дифференцированной среде; 3) идентификация с использованием ограниченного набора наиболее надежных тестов. При анализе использовали концентрат Бонде с красителем - кристаллическим фиолетовым.На втором этапе производили высев на среду «блеск».  Засеянную среду помещали в термостат при 37⁰ на 24-42 часа, с предварительным просмотром через24 часа.Металлический блеск колоний Pseudomonas aeruginosa не был обнаружен.

Микробиологический контроль качества тоника

Посевы делались  вчашках Петри, которые заливали расплавленной и охлажденной до 48-50 ⁰С агаризованной средой. Чашки с посевами инкубировалисьпри температуре (30±1)⁰ С    в течении (72±3) ч..

Количество микроорганизмов в 1,0 г тоника (М) вычисляли по формуле:

                                                 М    =             N  

                                                                   m       *   C       (9),

где   N- степень разведения навески;

        m – количество инокулята, внесенное в чашку Петри, мл;

      C -   среднее арифметическое значение числа колоний.

По результатам микробиологических исследований количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов, выраженное кое/г (кое колониеобразующие единицы) составило 2 кое/г.

              Определение дрожжей и плесневых грибов осуществляли с помощью методики, основанной на посеве определенных количеств тоника в селективные среды, культивировании посевов, подсчете всех видимых колоний дрожжей и плесневых грибов, типичных по макро- и микроскопической морфологии.Нами был использован метод мембранной фильтрации,при котором в воронку фильтровального аппарата вносили тоник. Затем фильтр переносили в чашки Петри на поверхность агаризованной среды. Чашки с посевами выдерживали в термостате при температуре (24±1)⁰С в течение 5 суток спредварительным учетом выросших колоний через 2 суток. По истечению 5 суток нами не были обнаружены крупные, выпуклые, матово-блестящие или плотные с ровными краями серовато-белые колонии.

      При анализе тоника на Pseudomonasaeruginosa   использовали концентрат Бонде с красителем - кристаллическим фиолетовым.На втором этапе производили высев на среду «блеск».  Засеянную среду помещали в термостат при 37⁰ на 24-42 часа, с предварительным просмотром через24 часа.Металлический блеск колоний Pseudomonas aeruginosa не был обнаружен.

                 Методы выявления и определения стафилококков посевом с предварительным обогащением основаны на высеве навески в жидкую селективную среду, инкубировании посевов, пересеве культуральной жидкости на поверхность агаризированной селективно-диагностической среды, подтверждении по биохимическим признакам принадлежности выделенных колоний стафилококков. Перед посевом рН тоника при помощи стерильных растворов лимонной кислотыдоводили  до 7,0±0,2 для предотвращения снижениярН   среды. Посевы инкубировали при температуре(36±1)⁰в течение 48 часов.

Статистическая обработка результатов экспериментов

Результаты экспериментальных исследования обрабатывались на IBMPC 550 с использованием пакета прикладных программ EXCEL.

Результаты исследований обработаны статистически с вычислением средней арифметической, ее стандартной ошибки и доверительного интервала; сравнение значения средних различий проводили по Стьюденту с использованием критерия t.

Данные исследований обрабатывали по ме­тодике И.А. Ойвина,. По результатам серии опытов, для каждого показателя выводили значение средней арифметической (М). На основе полученных М вычисляли величины квадратичных отклонений (а) по формуле:

                     (10)        

где а² - сумма квадратов отклонений каждой измеренной величины от М, n - число опытов. Из значений s и n вычисляли среднюю ошибку (m) по формуле:                                                              (11)

Определяли показатель существенности разницы - число, показы­вающее во сколько раз разность между средними арифметическими величинами больше значения корня квадратного из суммы квадратных средних ошибок, рассчитывали по формуле:

                         (12)                     

На основании полученных результатов по таблице Стьюдента вычисляли вероятность различия (р). Различие расценивалось как достоверное при р < 0,05.В этом случае правильность вывода о существовании различий величин может быть подтверждена в 95% случаев.

ГЛАВА 3. РАЗРАБОТКА ОСНОВНЫХ БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ ПРОЦЕССОВ ПРОИЗВОДСТВА ТОНИКОВ ДЛЯ ПРОБЛЕМНОЙ КОЖИ

(результаты собственных исследований)

3.1. Подбор компонентов для производства тоников для проблемной кожи

           В программу профессиональногоухода за проблемным типом кожи,входит очищение, тонизирование, увлажнение, питание, а также защита от вредных факторов окружающей среды. Завершающим этапом очищения кожи является тонизирование, в результате которого удаляются остатки загрязнений, восстанавливаются липидные пластыв  межклеточном пространстве,  активизируютсямембраныклеток.

           Для повышениястимулирующих,витаминизирующих ибактерицидных свойств данноесредство должно содержать биологически активныйкомплекс, состоящийиз  водно-спиртовых экстрактовлекарственных трав, эфирных масели косметического глицерина.

3.1.1. Разработка состава  фитокомпозиции

Подбор лекарственных растений в фитокомпозицию тоника для проблемной кожи осуществлялся в два этапа. В начале изучили литературные данные о противовоспалительных и ранозаживляющих свойствах трав, влиянии биологически активных веществ растений на уровень секреции сальных желез и  противомикробное действие (Марголина, 2003). Особый интерес представляли травы, обладающие бактерицидными свойствами.  Изучив действиеразличныхрастений на кожный покров (Петрухина А. Т., 2003), мы остановились на листьях крапивы двудомной ишалфея лекарственного, цветках ромашки аптечной, календулы лекарственной и зверобоя продырявленного.

В выбранных нами растениях содержатся различные биологически активные компоненты. В листьях крапивыимеется хлорофилл, флавоноиды, дубильные вещества, кремневая и муравьиная кислоты, обладающиекровоостанавливающими  вяжущимдействием, макроимикроэлементы: витамин С, кальций, железо, калий,  атакже липиды.Экстракты  календулы содержат каротиноиды, эфирное масло, органические кислоты, обладающие противомикробным, противовоспалительным, ранозаживляющим иболеутоляющим действием (Воронков В.Н.,1993). В надземной части зверобоя продырявленного  содержатся биофлавоноиды, эфирное масло, дубильные вещества, аскорбиновая кислота, сапонины, небольшое количество холина и другие вещества, оказывающие бактерицидное действие. Листья  шалфея богаты эфирным маслом, биофлавоноидами, фитонцидами и алкалоидами. Цветы ромашки содержат эфирные масла, аскорбиновую кислоту, холин, липиды и других биологически активные соединения (GibsonJ. R., 1996). Биологически активные вещества ромашки аптечной (сесквитерпены, флавоноиды, каротиноиды, кумарины, эфирные масла) и шалфея лекарственного (терпены, сесквитерпены, олеиновая кислота, дубильные вещества), календулы лекарственной (каротин, ликопин, фитонциды, органические кислоты) в сочетанном применении обеспечивают бактерицидное, противовоспалительное и вяжущее действие. Антраценовые производные, флавоноиды зверобоя оказывают регенерирующее,биостимулирующее и мощное антимикробноедействие. Компоненты экстракта крапивы (витамины С, А, В2,муравьиная кислота, минеральные соли, дубильные вещества) оказывают  витаминизирующее и регенеративное действие на кожу.

Правильность сделанного вывода о составе растений подтверждалина втором этапе с использованием биологической модели – культуры патогенного пиогенного Staphylococcusaureus.Используя метод серийных разведений в жидкой питательной среде, была изученабактерицидная и бактериостатическая активностьводно-спиртовых экстрактов лекарственных растений и сборов в отношении пиогенного стафилококка. Для этогобраливодно-спиртовые экстракты моно трав и разводили от 1:2 до 1:128 в бульоне Хоттингера.  По результатам исследования бактерицидной активностикаждого объекта, мы увидели целесообразность увеличения концентрации календулы и шалфея в  сборах № 2 , №3 и № 4, так как эти травы обладают наибольшей активностью в отношении пиогенного стафилококка. Экстракты сбора №1, содержащего все травы в равной доле ; сбора №2, содержащего по   2 части календулы и шалфея и по 1 части крапивы, зверобоя и ромашки; сбора № 3, содержащего по 3 части календулы и шалфея и по 1 части зверобоя, крапивы и цветков ромашки; сбора    № 4,  содержащего по 4 части календулы и шалфея и по 1 части зверобоя, крапивы и цветков ромашки. Полученные данные по водно-спиртовым экстрактамлекарственных растений приведены в таблице 1.

Таблица 1 - Определение бактерицидной и бактериостатической активности водно-спиртовых экстрактов лекарственных растений

Водно-спиртовые экстракты лекарствен ныхрастений	Количество КОЕ стафилококка при высеве из разведений экстрактов	Количество КОЕ стафилококка при высеве из контроля:
Б	1:2	1:4	1:8	1:16	1:32	1:64	1:128	Экстрак та	Рост культу ры
Зверобой	-	-	-	3х102	1х103	105	3х109	3х109	-	3 х 109
Календула	-	-	-	-	3х102	5х106	3х109	3х109	-
Крапива	-	-	-	7х103	2х106	3х109	3х109	3х109	-
Ромашка	-	-	-	-	5х103	3х107	3х109	3х109	-
Шалфей	-	-	-	-	-	2х105	3х109	3х109	-
Сбор №1	-	-	-	-	3х104	5х106	3х109	3х109	-
Сбор №2	-	-	-	-	3х103	2х102	3х109	3х109	-
Сбор № 3	-	-	-	-	-	2х103	3х109	3х109	-
Сбор № 4	-	-	-	-	3х102	2х102	5х107	3х109	-
Спирт40°	-	-	-	9х104	3х106	3х109	3х109	3х109	-

Примечание: - КОЕ – колониеобразующие единицы;

                        - (-)   -   отсутствие роста микрофлоры.

Учет результатов проводили визуально по отсутствию или наличию помутнения содержимого пробирок, а также путем высева изучаемых препаратовкаждого разведения и из контрольных пробирок на плотные питательные среды: желточно-солевой агар и 5% кровяной агар. Последнее разведение экстрактов  лекарственных трав, высев из которого не далроста колоний стафилококка, принимали за минимальную ингибирующую концентрацию – бактерицидное действие испытуемого препарата. О бактериостатическом действии изучаемых препаратов судили по количеству КОЕ стафилококка в конкретном разведении препарата, по сравнению с КОЕ стафилококка, высеянного из контроля культуры. Снижение в опыте КОЕ стафилококка на порядок и более, по сравнению с контролем, свидетельствовало о бактериостатическом действии изучаемых препаратов.

Бактерицидная активность 40 % спирта этилового, с помощью которого проводилась экстракция, отмечена в разведении 1:4, а бактериостатическая в разведении 1:8 – 1:16. Следовательно, бактерицидная и бактериостатическая активность водно-спиртовых экстрактов зверобоя, шалфея, ромашки., календулы, сборов №1, 2,3,4 проявлялась не только за счет действия спирта, но и благодаря действию на стафилококк экстрагируемых из данных лекарственных трав биологически активных веществ.

Для приготовления фитокомпозиции мы выбрали сбор № 3, так какон обладает наибольшей активностью в отношении стафилококка.   Оптимальныйбактерицидный, витаминизирующий и дезодорирующий эффект обеспечивается за счет синергетического действия биологически активных компонентов, извлеченных в ходе водно-спиртовой экстракции фитокомпозиции.

Основным  источником липидов в косметических тониках для проблемной кожи являются лекарственные растительные средства. Для исследования фракционного состава фосфолипидов, извлекаемых в ходе водно-спиртовой экстракциииз фитокомпозиции зверобоя, шалфея, календулы, ромашки и крапивы, нами был проведен хроматографический анализ экстракта. Результаты данного исследования представлены на таблице 2.

Таблица 2 - Фракционный состав суммарных экстрактов фосфолипидов растительного сырья (М±m).

Фосфолипидыфитокомплекса	Значение  (Rf)
1	2
Фосфатидилсерин	0,10±0,01
Фосфатидилинозит	0,17±0,01
Фосфатидилхолин	0,24±0,02
Фитогликолипиды	0,36±0,03
Фосфатидилэтаноламин	0,43±0,02
Фосфатидная кислота	0,51±0,01
Не идентифицированные пятна	0,49±0,01

На основании полученных данныхможно сделать вывод, что 40 % раствором спирта извлекается комплекс фосфолипидов,  использование которого в косметических препаратах будет способствоватьактивному  участию липидов впроцессахклеточной  регуляцииирегенерации  липидныхпластовв  межклеточномпространствекожи.

Количественное определение  липидов, извлекаемых водно - спиртовым раствором из растительного сырья проводили весовым методом. Подробно метод анализа описан во второй главе.  Содержаниелипидовдано  втаблице 3.

Таблица 3 - Количество липидов, извлекаемое 40%-мрастворомспирта  этилового из лекарственных трав.

Масса сухого остатка, мг	Объем раствора, мл	Количество липидов, мгмл
1	2	3
908±5	25±1,5	40±1,5
1006±6	25±1,3	42±2
826±5	25±1,4	37±1
940±5	25±1,6	41±1,5
1350±8	25±1,3	48±2,5
1237±8	25±1,5	46±2

Как видно из таблицы, содержание липидов вразработаннойфитокомпозицииколеблется от 37 до 48 мгмл реднем данное значение составило 42,33± 1,75.

    

3.1.2.Выбор вспомогательных сырьевых компонентов

Кроме фитокомпозиции в состав тоников входят следующие компоненты: глицерин косметический для смягчения и увлажнения кожи, масла эфирные в качестве дополнительного компонента БАВ,консерванты и вода.

Хроническая недостаточность жизненно необходимых элементов в организме закономерно проявляется патологией, сопровождаясь существенными морфологическими и клиническими нарушениями. Так, например, недостаток цинка вкожномпокрове  вызывает следующие патологические изменения: дерматит, экзему, фурункулез, трофические язвы, слабый рост и выпадение волос (Марголина А.А., 2002).Медь, цинк, железо играют роль активаторов биологических процессов в  коже. Кремний способствует биосинтезу коллагена, образованию кальцияв костной ткани, обеспечивает заживление ран. Органический кремний играет существенную роль в метаболизме липидов.

Содержание вприродной воде различных компонентов позволяет использовать ее в качестве сырья для производства косметических препаратов. Минеральные воды оказывают на кожу человека лечебное действие, обусловленное основным ионно-солевым и газовым составом.Химические  элементы, находящиеся в природной воде оказывают существенное влияние на процессы, происходящие в коже. Так, например,  Znрегулирует работу сальных желез и оказывает противовоспалительное воздействие,Mgи Caулучшают обменные процессы, происходящие в коже. Введение в рецептуру тоника минеральной или родниковой воды позволяет интенсифицировать некоторые процессы в клетках кожи за счет поступления широкого спектра эссенциальных микроэлементов, содержащихся в применяемом типе воды.

По предложению заслуженного деятеля науки, доктора медицинских наук, профессора В.И. Ефременко нами изучена возможность и целесообразность использования для получения липидного тоника  слабоминерализованной воды источников Северного Кавказа. Нами была взята родниковая вода из природного источника г. Ставрополя, называемого в народе «Родник Пресвятой Богородицы». Оценка   типовогосостава этой воды проведена нами, совместно с сотрудниками ассоциации «Биотех» на базе отдела изучения курортных ресурсов Государственного НИИ курортологии Минздрава России, в соответствии с требованиями ГОСТ 2874-82 и ГОСТ 13273-88. Анализ показал, в отличии от водопроводной воды, по макро ионным показателям родниковаявода относится к бессульфидным, слабоминерализованным водам, слабощелочной реакции среды. Вода обогащена сульфатными и карбонатными анионами и катионами магния, натрия и кальция.  Следует отметить, что по результатам исследований, в родниковой воде содержание сероводорода отсутствует. Основным анионом, превосходящим по содержанию другие, является гидрокарбонат-ион, а основным катионом является кальций, что и характеризует слабощелочные   свойства этой воды. Химический анализ микроэлементного состава природной воды свидетельствуето содержании меди, железа, цинка, а также кремния.Особый интерес представляет повышенное содержание кремния в исследуемой природной воде. Кремний необходим для нормального функционирования эпителия и соединительных тканей, которым онпридает прочность и эластичность.             

Для очистки, увлажнения с одновременным питанием проблемной кожи нами предложена следующая рецептура липидного тоникадля домашнего применения, массовая доля, % :

Фитокомпозиция лекарственных растений                                      25.0±0,3

масло эфирное розовое                                                              0.06±0,02

масло эфирное лавандовое                                                       0.02±0,01

глицерин косметический                                                          0.8±0,1

кислота салициловая                                                                 0.01±0,01

кислота лимонная                                                                      0.06±0,01

спирт этиловый, 96 %                                                                3,5±0,5

бензоат натрия                                                                            0,01±0,01

         дистиллированная вода                                                         15,0±0,5

родниковая вода                                                                      до100

Для профессиональных косметических кабинетов предложен следующий состав липидного тоникасерии «Profi line», рекомендуемый для использования при наблюдении врача-косметолога, (массовая доля %):

Фитокомпозиция лекарственных растений                                  45.0±0,6

масло эфирное розовое                                                              0.06±0,02

масло эфирное лавандовое                                                       0.02±0,01

глицерин косметический                                                          0.8±0,1

кислота салициловая                                                                 0.01±0,01

кислота лимонная                                                                      0.06±0,01

спирт этиловый, 96 %                                                                3,5±0,5

бензоат натрия                                                                            0,01±0,01

         дистиллированная вода                                                             15,0±0,5

родниковая вода                                                                          до100

В рецептуру тоника введен комплекс масел эфирных розыи лаванды. Выраженное противовоспалительное, бактерицидное действие лавандового и розового эфирных масел, а также смягчающий и седативный эффект масларозы позволяют существенно усилить желаемый эффекти  не вводитьврецептуру  синтетическуюотдушку.Применение  массовой концентрации эфирных  маселниже заявленной в рецептуре, не обеспечивает нужного тона аромата и концентрации биологически активных веществ, при введении в состав тоника количества маславыше указанного в рецептуре средство приобретаетрезкий запах.

В качестве смягчающего и увлажняющегокомпонента в рецептуру введен глицерин косметический.  Уменьшение концентрации глицерина  ниже указанного предела не обеспечивает смягчающего и увлажняющего эффекта, увеличение дозировки создает плотную консистенцию.

От эффективности антибактериального действия консерванта зависит  качество и безопасность тоника, поэтому его подбориграет немаловажную роль. Критериемэффективности консерванта является снижение числа жизнеспособных клеток микроорганизмов в препарате за определенный период времени. В качестваконсервантав рецептуру введены кислота салициловая, обладающая кератолитическим действием и  бензоат натрия, предотвращающий и ингибирующий рост микроорганизмов.Бензоат натриячасто применяется в пищевой промышленностипри  консервациипродуктов. Уменьшение дозы консерванта не обеспечивает заданный эффект, а увеличение – может повлечь за собой аллергические реакции кожи.

В качестве регулятора рН растворатоникав рецептуру  достаточно ввести кислоту лимонную.  Одновременнолимоннаякислота  усиливаетбактерицидностьтоника. Увеличение ее концентрации выше предлагаемой может привести к аллергической реакции и сухости кожи.

Заявленное содержание спирта этилового, в соответствии с общими требованиями ГОСТ Р 51579-2000 «Изделия косметические жидкие. Общие технические условия» на тоники косметические, обеспечивает некоторый  консервирующий эффект и растворение компонентов. Введение спирта этилового в количестве выше выбранного предела нецелесообразно, т.к. избыток спирта оказывает дубящее воздействие на кожу, пересушивает ее, а недостаток спирта не обеспечивает искомое, консервирующее и растворяющее действие на компоненты.

3.2. Разработка биотехнологии приготовления тоника для проблемной кожи

      Технологический процесс приготовления липидныхтоников для проблемной кожи состоит из нескольких стадий производства:

- подготовки сырья;

- получения экстракта лекарственных растений;

- приготовления растворов для производства;

- получения готового продукта;

- фасовки, упаковки и хранения тоника.

Рассмотрим подробнее каждый из этих процессов.

Стадия подготовки сырья

Подготовка сырья включает в себя процессы взвешивания порошков, отмеривания жидкостей, измельчения растений. Нами разработана блок-схема данной технологической стадии (рисунок3).

Стадия подготовки сырья

Загрузка растительных объектов, порошкообразного и жидкого сырья в сборник

дозирование порошков (по массе)

дозирование жидкости (по объему)

дозировка растительного сырья

                

Измельчение растительного сырья

На стадию приготовления растворовНа стадию экстракции

Рисунок 3 -Блок схема стадииподготовки сырья для производства тоника для проблемной кожи.

         Салициловую и лимонную кислоты, бензоат натрия в необходимом количестве взвешивают на весовом дозаторе и подают на стадию приготовления растворов. Раствор спирта этилового и дистиллированная вода после объемных дозаторов подаются на стадию экстрагирования.

Родниковую воду перед подачей на экстракцию подвергают стерилизации. Для этого воду разливают в стеклянную тару, укупоривают и стерилизуют в автоклаве паром в течении 30 минут при давлении 1,5 атм и температуре 119-120 ⁰ С.Лекарственные растения для производства липидных тониковберут вследующем соотношении:по 4 части календулы и шалфея и по 1 части зверобоя, крапивы и цветков ромашки. Эффективность данного соотношения доказана на биологической модели пиогенного стафилококка. Размер измельченных частиц лекарственных трав составляет 3-5 мм.  Увеличение размера частиц выше 5 мм приводит к уменьшению степени извлечения БАВ.Уменьшение частиц ниже 3 мм вместе сповышением степени извлечения БАВувеличивает потери продукта при фильтрации. Подготовленное сырье передается на основные технологические стадии.

Экстрагированиелекарственных растений

Стадия получения экстрактов лекарственных растений является определяющей в производстве тоников для проблемной кожи, поэтому она рассматривается более подробно. Процессы данной стадии, включающие приготовление водно-спиртового раствора, экстракции лекарственных растений и фильтрации полученного экстракта, представлены в видеблок-схемы на рисунке 4.

Стадия экстрагирования растительного сырья

Приготовление водно-спиртового раствора

Приготовление фитокомплекса

                                                                                                                                                                                

Экстрагирование лекарственных растений

Фильтрование экстракта

Отходы обедненной травы на переработку

На стадию получения тоника

Рисунок  4 -Блок- схема стадии получения экстракта лекарственных растений

    40%-ый водно-спиртовый раствор готовят из спирта этилового 96%-го путем добавления спирта к дистиллированной воде в соотношении 35% и 64,2% соответственно. Полученный водно-спиртовой растворнаправляется в реактордля экстракции лекарственных трав. Полученный водно-спиртовой раствор  направляется в реактордля экстракции лекарственных трав. ЛРС в реакторе располагается на мелко-ячеистой решетке, высота слоя сырья составляет 1,5 – 2 см. При взаимодействии с измельченными  травами в нем хорошо растворяются извлекаемые компоненты и значительно слабее или практически не растворяются остальные компоненты.В случае водно-спиртовой экстракции крапивы, зверобоя, ромашкикалендулы и шалфея в раствор перейдут дубильные вещества, органические кислоты, алкалоиды, флавоноиды, каротиноиды и терпены.

      Процесс извлечения БАВ из растительного материала можно условно разделить на две стадии:

- быстро протекающий, связанный с растворением и смывом веществ с поверхности материала;

-  медленный, связанный с диффузией веществ через клеточную стенку и неподвижные слои жидкости в капиллярных и полузакрытых областях (М.А. Балабуткин, 1993).

Полнота и скорость экстрагирования действующих веществ из растительного сырья зависят от качества самого сырья и его технологических свойств, которые описываются рядом параметров, учитывающих природу растительного материала, способ и степень измельчения, удельную, объемную и насыпную плотности, пористость и порозность, свободный объем слоя, удельную поверхность и другие параметры.

Выход веществ при экстрагировании определяется факторами, влияющими на процесс массоотдачи внутри частиц сырья и в свободном экстрагенте: гидродинамические условия и температурный режим процесса, характер загрузки сырья в экстрактор, выбор и способ подачи экстрагента и другие.  

В фармацевтической и косметической промышленности используются следующие методы экстрагирования: мацерация, ремацерация, перколяция, реперколяция, противоточное и циркуляционное экстрагирование и др. Методы отличаются друг от друга временем экстрагирования, способом распределения сырья в экстракторе, аппаратурой.Выбор метода определяется эффективностью выхода готового продукта.

Нами был выбран метод циркуляционного экстрагирования, сущность которого заключается в многократной экстракции растительного сырья  одной и той же порцией  экстрагента (А.М. Балабуткин, 1993). В качестве экстрагента выбран40 %-ыйраствор этилового спирта.В результате экстракции из растительного лекарственного сырьяизвлекаютсявещества как водорастворимые, так и спирторастворимые.В извлечениях, содержащих не менее 20 % спирта, не развиваются микроорганизмы (В.Л Багирова, В.А. Северцев, 2001). Фитокомпозиция готовится в смесителе, куда из весовых дозаторов поступаютизмельченныелекарственные травы в предложенном ранее соотношении. Метод позволяет получить достаточно высокую массовую долю экстрагируемого вещества, обеспечивает герметичность проводимого процесса

Водно-спиртовый раствор для экстракции готовят в смесителе, кудавода и спирт поступают из объемных дозаторов. Экстракцию ведут в реакторе-экстракторе при непрерывном перемешивании в течение 10-12 часов при комнатной температуре, с соблюдением определенного атмосферного давления.С целью уменьшения потерь легколетучих веществ пары спирта конденсируются в холодильнике и возвращаются в технологический процесс.Технологическая схема и принцип улавливанияпаров спирта взята из работыкандидата биологических наук Умнова А.В (А.В.Умнов,2001 года).

Полученный в реактореспиртовый раствор фитокомпозиции поступает на стадию фильтрования, где отделяется от обедненных активными веществами растений. Раствор подается на стадию приготовления готового продукта. Обедненныетравы идут на  стадию экстрагирования дистиллированной водой для получения увлажняющихпрепаратов.

Нами составлен материальный баланс стадии экстрагирования лекарственных растенийпроизводства тоника для проблемной кожи в домашних условиях  (таблица 4) из расчета на 100 кг готового продукта. Экспериментально установлено, что потери легколетучих веществ на данной стадии составляют 3,6%, выход обедненнойбиологически-активными веществами травы – 16,2 %.

     Таблица 4 - Материальный балансстадии получения водно-спиртового экстракта лекарственных растений

Приход	Расход
1	2
Наименование сырья для производства тоника для проблемной кожи	Количество	Наименование готовой продукции	количество
кг	%	кг	%
Водно-спиртовой экстракт	26,66	88,44	Готовый продукт Побочный продукт – обедненные травы Потери	26,63 3,48 0,26	87,69 11,45 0,86
Лекарственное сырье	3,71	11,56
Всего:	30,37	100	Всего:	30,37	100

      Выход фитокомпозиции, состоящей из экстрактов ромашки, шалфея, крапивы, зверобоя, календулысоставляет 87,69 %.

Приготовление растворов для производства

          Для производства тоников для проблемной кожи готовят следующие растворы:  эфирных масел, лимонной и салициловой кислот. Нами разработана блок-схема технологической стадии приготовления растворов, которая представлена на рисунке 5:

Стадия приготовления растворов

дозирование порошков

дозирование спирта этилового

дозирование воды дистиллированной

Приготовления раствора салициловой кислоты

Приготовление раствора масла розы

Приготовление раствора масла лаванды

Приготовление раствора лимонной кислоты

На стадию получения тоника

Рисунок 5  - Блок-схема приготовления растворов для производства тоника

Спиртовые растворы салициловой кислоты, эфирных масел розы и лаванды готовят при растворении их в 96 % растворе спирта этилового в ходе непрерывного перемешивания при температуре 20-25⁰ С в течение 15-20 минут. Водный раствор салициловой кислоты готовятпри  непрерывномперемешиваниипри температуре 35-40⁰ С в течение 25-30 минут.

Нами был разработан материальный баланс стадии приготовления рабочих растворов (таблица 5) из расчета на 100 кг готового продукта.

Таблица 5 - Материальный баланс технологической стадии приготовлениярастворов.

Приход	Расход
1	2
Наименование сырья для производства тоника для проблемной кожи	Количество	Наименование готовой продукции	количество
кг	%	кг	%
Эфирное масло розы Эфирное масло лаванды Кислота салициловая Кислота лимонная Спирт этиловый 96 % Вода дистиллированная	0,06 0,02 0,01 0,06 0,71 0,15	5,94 1,98 0,99 5,94 70,30 14,85	Спиртовый раствор масла розы, в т.ч. масло розы Спиртовый раствор масла лаванды, в т.ч. масло лаванды Водный раствор кислоты лимонной, в т.ч. кислота лимонная Спиртовый раствор кислоты салициловой, в т. ч.кислота салициловая Потери	0,19 0,06 0,48 0,02 0,21 0,06 0,11 0,01 0,02	18,81 47,53 20,79 10,89 1,89
Всего:	1,01	100	Всего:	1,01	100

Полученные растворы направляют в реактор для получения тоников для проблемной кожи.

Получение липидных тоников для проблемной кожи

На стадии получения липидныхтоников происходят следующие процессы:в водно-спиртовый раствор фитокомпозиции добавляютспиртовыерастворы  салициловой кислоты и эфирных масел, водный растворлимонной кислоты, затем консерванты и глицерин.Нами разработана блок-схема заключительной технологической стадии получения фитотоника (рисунок 6)

Стадии получения липидного тоника

Дозировка

Объемная- экстракта фитокомплекса

Объемная- растворов масел и кислот

Объемная- глицерина

Весовая –консерванта

Объемная- воды родниковой

Стерилизация

Технологический процесс получения тоника

                                                                                                       

Фильтрация

Фасовка и упаковка

                                                                                                     Обедненные травы

Готовый продукт

Рисунок 6-  Блок-схема стадии получения  липидных тоников для проблемной кожи

В реактор с включенной мешалкой подается слабоминерализованная родниковая вода, прошедшая стерилизацию и затем в строго определенных  количествах порошок бензоата натрия, спиртовый экстракт фитокомпозиции,растворы лимонной и салициловой кислот, раствор глицерина косметического. Процесс приготовления липидного тоника ведут при температуре 18-23⁰ С в течении 40-45 минут. Полученный раствор фильтруют через бязевый фильтр и подают на заключительную стадию фасовки и упаковки готового продукта. Обедненнуютраву отправляютдля изготовления фитоаэрозолей с увлажняющим эффектом.

Фасовку тоника для домашнегоухода  запроблемной кожей осуществляют c помощью объемного дозатора в сертифицированныефлаконы из пластмассы по 100 г., продукцию профессиональнойлинии  « Profiline» , содержащую вдвое больше БАВфасуют по225 г. в полимерные тубы.

Флаконы вручную укупоривают стерильнойпробкой полиэтиленовой и крышкой навинчивающейся. На каждый флакон наклеивают этикетку в соответствии с требованием действующего стандарта – с указанием изготовителя, его товарного знака, названия препарата, его состава, способа применения, условия хранения, регистрационного номера, номера серии, срока годности, штрих-кода. Каждый флакон с инструкцией по применению укладывают впачку из картона коробочного, на которую нанесен тот же текст, что и на этикетке.

Расфасованный тоник для проблемной кожи сдают на анализ вотдел технического контроля. После получения положительногозаключения ОБТК коробки обвязывают хлопчатобумажными нитками особой прочности № 00, концы ниток заклеивают этикеткой из бумаги этикеточной по ГОСТ 7525-86Е. Готовые стопки продукции складируют на поддон и передают на  хранение на складготовойпродукции.

В отделе технического контроля выборочно (не менее 20 флаконов из серии) отбирают продукцию наанализ. При соответствии качества требованиям документации на коробке ставится штамп проверки и готовую продукцию отправляют на склад.

Нами составлен суммарный материальный баланс всего технологического процесса получения тоника из расчета на 100 кг готового продукта (Таблица 6 )

Таблица6 - Материальный баланс производства липидного тоника для проблемной кожи для домашнего ухода

Приход	Расход
1	2
Наименование сырья для производства тоника для проблемной кожи	Количество	Наименование готовой продукции	Количество
кг	%	Кг	%
Спиртовый раствор фитокомплекса	26,63	25	Тоник для проблемной кожи Отходы обедненной травы Потери	100,00 3,48 3,04	93,83 3.33 2,84
Раствор масла розы, в т.ч. масло розы	0,19 0,06	0,18 0,06
Раствор масла лаванды, в т.ч.масло лаванды	0, 48 0,02	0, 45 0,02
Глицерин косметический	0,85	0,80
Раствор кислоты лимонной, в т.ч. кислоты	0,21 0,06	0,20 0,06
Раствор кислоты салициловой, в т.ч. кислота	0,11 0,01	0,10 0,01
Бензоат натрия	0,01	0,01
Вода дистиллированная	15, 01	14,08
Вода родниковая	63,01	59,15
Всего:	106,52	100	Всего:	106,52	100

Общий выход готового продукта составляет 93,83 %. Заявляемое содержание всех составляющих компонентовв рецептуре косметического средства оптимально обеспечивает достижение очищающего, смягчающего,тонизирующего,питательного и увлажняющего эффекта.

3.3. Экспериментальное исследование биологической активности фосфолипидных тоников (практические методы)

3.3.1.Изучение противовоспалительного действия

Экспериментальное изучение ранозаживляющего и противовоспалительного действия разработанных тоников, проводили совместно с сотрудниками Пятигорской Фармацевтической Государственной академии. Противовоспалительное действие определяли методом онкометрии, с использованием белых беспородных крыс-самокмассой до 200 г. Животных отбирали таким образом, чтобы исходный средний объем лапок во всех экспериментальных группах был примерно одинаков.Экспериментальных животных разбивали на5 групп по 6 особей в каждой.Количество  группживотныхобосновано  тем,что   представляло  интересисследованиебиологической  активностинетолько  разработанноголипидноготоника,  ноикомплексного  егоприменениявместе  слипосомальнымкремом,  содержащимтакуюже  фитокомпозициюрастительногосырья,  чтоитоник.

Сущностьметода состоит в следующем. Крысам под апоневроз лапки вводили 0,1 мл 10% суспензии каолина в качестве флогогена, что вызывало, развивающейся во времени отек лапки. Степень отека отражала интенсивность воспаления. Величину отека измеряли по количеству вытесненной из капсулы онкометра воды при погружении в нее лапки.

Первой группе животных вводили только каолин. Эта группа являлась контрольной. Животным второй и третьей групп за день до эксперимента триждыв  суткии за 30 минутдо начала опыта наносили на лапку тоники для домашнего и профессионального ухода. Животным четвертой и пятой групп наносили соответственно тоники и через 5-10 минут липосомальный крем для проблемной кожи по аналогичной схеме.

Онкометрическое измерение объема лапок в каждой группе животных проводили через 1, 2, 3 и 24 часа после введения в лапку каолина.Результаты подвергали статистической обработке по методу Стьюдента. Полученные экспериментальные данные представлены на рисунке 7:

Примечание: Тоник 1 – препарат для ухода за проблемной кожей в домашних условиях;

Тоник 2– препарат для ухода за проблемной кожей в  условиях профессиональных косметологических   кабинетов;

Комплекс 1 – комплексТоника 1 и липосомального крема для проблемной кожи;

Крем – липосомальный крем для проблемной кожи.

Комплекс 2 – комплекс  Тоника 2 и липосомального крема для проблемной кожи.

Контроль –  отсутствие обрабатывающих средств.

Рисунок7 -   Динамика противовоспалительного действия липидных препаратов

Как следует из полученных данных, противовоспалительное действие тоника для домашнего ухода на 3,4%, профессионального тоника- на 10,7% превышает показатели в контрольной группе животных. Воздействие на кожу тоника«ProfiLine» в сочетании с липосомальным кремом на5,8 %эффективнее  по сравнению с действиемкрема,на 43 %   в сравнение с тоником   «Profi Line» и на53,7% по сравнению с контролем.

По степени выраженности противовоспалительного эффектакомплексное воздействие на кожу тоника«ProfiLine» и липосомального крема имеет наибольшую эффективность, по сравнению с действием  контроля, тоника для ухода за проблемной кожей в домашних условиях и только тоника «ProfiLine».Противовоспалительное и ранозаживляющее действие тоника«Profi Line»значительно выше, чем у тоника для ухода за проблемной кожей в домашних условиях.

Такимобразом,целесообразно  рекомендоватькосметологами  пользователямкомплексноеиспользование  липидныхтоникови  липосомальногокремадля  леченияиухода  запроблемнойкожей.

3.3.2. Изучение ранозаживляющегодействия

В ходе изучения ранозаживляющего действия липидных тоников  животным была проведена операция нанесения линейных кожных ран под эфирным наркозом. Кожу спины разрезали до собственной фасции, длина разреза составляла 25±1 мм. Затем на равном расстоянии накладывали 2 шва сближающие края раны. Для удобства последующего измерения размеров ран накладывались швы с таким расчетом, чтобы эпителий боковых краев раны не соприкасался, и в этом случае эпителизация происходила от конечных краев раны. Оценку ранозаживляющего действия проводили по наличию нагноения, времени полного отторжения струпа, времени и динамики полного срастания краев раны на 5, 10 и 15 дни наблюдения. Прочность образовавшегося рубца определяли методом тензометрии после полного заживления ран на 16 день от начала опыта.

Липидные тоники наносили на раны животным по следующей схеме: в первойи второй группе липидные тоники для домашнегоипрофессиональногоухода, в третьей и четвертой группе тоники в сочетании с последующей аппликацией липосомального крема для проблемнойкожи. Изучаемые лекарственные формы наносили на рану ежедневно 2-х кратно на протяжении 15  дней до полного заживления ран. Пятая группа животных являлась контрольной, раны животных вэтойгруппе  ежедневно 2-х кратно обрабатывались дистиллированной водой.

Динамика заживления ран в группах экспериментальных животных по степени уменьшения их линейного размерапредставлены в таблице7:

        Таблица 7 - Показателиранозаживляющегодействия  липидныхпрепаратов

Иссле- дуемый объект	Средний исходный линейный размер раны (мм.)	Средний линейный размер раны (мм.) на 5 день	Средний линейный размер раны (мм.) на 10 день	Средний линейный размер раны (мм.) на 15 день
1	2	3	4	5
Контроль	25±1,5	23,4±2,2	18,3 ±1,6	7,1 ±1,3
Тоник 1	25±1,0	22,6 ±1,2 Р>0,05 Р1>0,05	17,4± 1,3 Р<0,05 Р1>0,05	6,8±1,1
Тоник 2	25±1,0	21,4 ±1,5 Р>0,05 Р1>0,05	17,0± 1,2 Р<0,05 Р1>0,05	6,0±1,1
Комплекс1	25±1,5	21,0±1,2 Р>0,05	12,1±1,6 Р<0,05	0,5±0,1 Р<0,001
Комплекс 2	25±1,0	20,0±1,2 Р>0,05	10,1±1,4 Р<0,05	0 Р<0,001

Примечание: Тоник 1 – для ухода за проблемной кожи в домашних условиях; Тоник 2– для ухода за проблемной кожи вусловиях косметологического кабинета «Profi Line»; Комплекс 1 – совместное применение  Тоника 1 и крема для проблемной кожи; Комплекс 2 - совместное применениеТоника 2 и крема для проблемной кожи.

Как  видноизполученных  данных,в контрольной группе животных, не получавших лечение к концу  эксперимента длина раны уменьшилась на 71,6%. В группе животных, получавших Тоник 1,начиная с 10 дня, наблюдалась лишь незначительная тенденция к ускорению заживления ран и к концу эксперимента рана сократилась на 72,8%. В третьей группе  раны заживали быстрее и на 15 день длина раны уменьшилась на 76%. В группе животных, получавших Комплекс 1 заживление ран происходило интенсивнее, о чем свидетельствует 98 %- е заживление раны. Полное заживление ран к 15 дню эксперимента наблюдали в пятой группеживотных,  которыхлечилилипидным  тоникомсерии«ProfiLine»илипосомальнымкремом  дляпроблемнойкожи.

Динамиказаживления  ранпослеприменения  липидныхпрепаратовнаглядно  показананарисунке 8.

Размер раны, мм

                           

                                                               5          10           15           время, сутки

Рисунок 8 - Динамика заживления ран у крыс после применения липидных препаратов

Как  видноизграфических  линийна15-й  деньприменениялипидных  препаратов ранозаживляющая  активностьлипидноготоника,  серии «ProfiLine»,применяемогов  сочетаниислипосомальным  кремомдля проблемной  кожина 9 % выше,чем  прикомплексномиспользовании  тоникадлядомашнего  уходаилипосомальногокрема.  Эффективность комплексного действия на 11 %выше,  чемутоника  серии«ProfiLine»,применяемогобез  крема,на   14 %  выше,чему  тоникадлядомашнего  уходаина12 % вышепосравнению  сконтролем.

Таким образом, результаты опытов в тесте с заживлением линейных кожных ран показали, что липосомальный крем  в сочетании с тоником,  содержащимтакуюже фитокомпозицию, оказывают достоверно выраженный ранозаживляющий эффект. Тоник, применяемый как самостоятельное средство, обладает слабым ранозаживляющим  эффектом.

На рисунках 9-11 представленыфотографии линейных ран лабораторных животных к концу эксперимента.

Рисунок 9-  Видлинейной раны в группе контрольных животных

Изрисунка  видно,чтов  контрольнойгруппеживотных  наблюдается   неполноеотторжение  струпа,рубецполностью  несформирован.

Рисунок10 -  Вид линейнойраны в группе животных, получавших тоник для домашнего ухода

Изрисункавидно,  чтоприиспользовании и липидноготоника  длядомашнегоухода  кконцуэксперимента  такженепроизошло  полноеотторжениеструпа,  рубецполностьюне  сформировался.Однако,по  сравнениюсконтрольной  группойранастала  значительноменьше.Эффективность  действиятоникаочевидна.

Рисунок 11 -Вид  линейнойраны в группе животных, получавших   всочетаниилипосомальный  кремитоник  длядомашнегоухода

Данноефотосвидетельствуето  явномранозаживляющемдействии  липидногофитотоникаи  липосомальногокрема,содержащего  экстрактылекарственныхрастительных  трав,включенныев  липидныевезикулы

При микроскопическом исследовании гистологических срезов в области линейной кожной раны на 16 день после ее нанесения обнаружено, что в контрольной группе животных полной эпителизации в центральных зонах линейной раны не произошло. Полной регенерациидермы нет: наблюдается полостной дефект дермы как результат незавершенной регенерации. На поверхности раневого дефекта сохранен струп, под края которого нарастает эпидермис. Сформировавшаяся грануляционная ткань имеет значительные размеры.

В группе животных, получавших только тоники, гистологическая картина приближается к контрольной группе, однако тканевой дефект в регенераторной области значительно меньше, струп отсутствует, практически полностью завершена эпителизация рубца.

В группе животных, получавших комплексное лечениетоника  икрема, наблюдается полная эпителизация поврежденных тканей. В области дермы полостных дефектов нет. Струп отсутствует. Сформировавшийся рубец представлен нежной пластинкой соединительной ткани, состоящей из фибропластов.

На 16 сутки после операции животных наркотизировали этаминалом натрия (20 мг/кг) и вырезали кусочки кожи с зажившими ранами шириной 1см, длиной 3см. Полученные кусочки кожи фиксировали одним концом в верхней точке прибора для тензометрического измерения прочности рубца с помощью специального зажима, а к нижнему концу кусочка кожи подвешивали другой зажим с площадкой для установки гирь. Массу гирь постепенно увеличивали до получения разрыва рубца.Масса большого значения, необходимая для разрыва рубца, свидетельствовала о величине прочностирубца заживления раны.

Схема прибора для изучения ранозаживляющего действия фосфолипидных тоников представлена на рисунке 12.

4

2

1

3

5

Примечание: 1-Упор; 2-Зажимы; 3- Лоскут кожи;4 ;5-Блок.

Рисунок 12 - Схема прибора для тензометрического измерения прочности рубца.

Полученные на данном приборе показатели прочности рубца даны в  таблице8.

Таблица 8 - Показатели влияния липидных препаратов на прочность

сформировавшегося рубца зажившей раны

Срок эксперимента	Прочность рубца на разрыв, г.
Контроль ная группа	Группа, получавшая тоник 1	Группа, получавшая тоник 2	Группа, получавшая совместно тоник 1 и крем	Группа, получавшая совместно тоник 2 и крем
1	2	3	4	5	6
15 суток от нанесения раны	337,5 ±33,2	352,3 ±34,6 Р>0,05	378,9 ±35,8 Р>0,05	429,1 ±33,6 Р<0,05	467,4 ±32,7 Р>0,05

Р – значение погрешности значений по отношению к контролю

Полученные данные свидетельствуют о целесообразности применения для леченияиухода  завоспалительной кожей в комплексе липидныхтоников и липосомального крема, содержащего  идентичнуюфитокомпозицию лекарственных растений.

Прииспользовании  тоникасерии«Profi Line»в  сочетаниислипосомальным  кремом прочность сформировавшегося рубца  на8 % выше,чем  врезультатеприменения  тоникадлядомашнего  уходавместес  кремомдляпроблемной  кожи. Эффективность егона18 %  выше,чемпри  применениипрофессиональноготоника  безкрема,на 24 %  выше,чемпри  использованиитоникас  меньшейконцентрациейфитокомпозиции.

Такимобразом,можно   сделатьвывод,что  увеличениеконцентрациифитокомпозициив  2разаповышает  ранозаживляющеедействиелипидного  тоникана8 %.

3.3.3. Изучение увлажняющего действия тоника

Известно, что вода, содержащаяся в клетках кожи,хорошопластифицирует роговой слойи предает ему эластичность. Если клеткатеряет влагу, то кожа становится суше иначинается трескаться, появляются морщины. В кожном покрове существует градиент концентрации воды, обусловленный непрерывной потерей влаги поверхностью кожи. Если в жизнеспособных эпидермальных клетках содержание воды составляет 70% от веса клеток, то в нижнем роговом слое – около 30%, а около поверхности кожи содержание воды составляет только 10% от веса роговых клеток (Л.Э. Старанникова,2003).

    Для оценки влажности кожи добровольцев нами использовался приборфирмы «Uishy»(Франция), работа которого основана на измерении электропроводности кожи. При помощи этого прибораустанавливаетсяпроцентное содержание влаги в эпидермисе кожи. Для оценки степени увлажнения кожи  липиднымитоникамиосуществлялись измерения в трех точках на лице добровольцев- на лбу, подбородке, и щеке. В исследованиях участвовало 36 женщин в возрасте от 14 до 37 лет.

Сущность метода. На первоначальном этапе была изучена влажность чистой кожи клиентов, измерение проводили через 30 минут после очистки кожи дистиллированной водой. Затем измерения проводили через 5 минут, 15 и 60 минут после нанесения липидных тоников. Полученные данные свидетельствуют о том, что разработанный липидныйтоник обладает увлажняющим действием.

Полученные показатели влажности после нанесения липидного тоника для домашнего ухода  приведены в таблице 9:

Таблица 9 -  Показатели влажности у людей с проблемным типом кожипосле  нанесениялипидноготоника,  %

Возрастная группа женщин	Влаж- ность чистой кожи	Влажность кожи после нанесения тоника
через 5 мин	через 15 мин	через 30 мин	через 45 мин	через 60 мин
14-22 года	36.3±0.1	36.4±0.3	38,0±0,3	38.9±0. 5	36.8±0.2	36.4±0.1
22-27 лет	35.2±0,1	37.6±0.2	38,1±0.3	39.2±0,4	35.7±0.1	35.4±0.1
27-37 лет	35.0±0.2	36.0±0.3	36.4±0.3	37.3±0.4	36,3±0.4	35,1±0.3

Как видно из таблицы, эффект увлажнения достигает максимального значения через 30 минут (Δ = +6,3%) и сохраняется в течение 15 минут. Одновременно следует отметить, что с возрастом человека влажность кожи уменьшается и эффект самого увлажнения снижается. Так, в 14-22 года  максимальное изменение влажности во времени составляет 3,6 %, в 22-27 лет – 2,8 %, в 27-37 лет – 2,3 %.

Подобная тенденция наблюдалась также в ходе применения липидного тоника для профессионального использования. Однако сам эффектувлажнения составилв среднем  8,7 %и сохранял свое действие в течение 20 минут.

Присравнении  результатовполученныхвходенашего  исследованиясданными  диссертационнойработыНосенко  М.А. (2004)установлено,что  сочетаниеприменениялипосомальногокрема  илипидноготоника  содинаковымсоставом  фитокомпозицииусиливаетпротивовоспалительное,и  ранозаживляющеедействиепримерно  на9,2 % .

Таким образом - с помощью биологической модели пиогенного стафилококка подобрана рецептура композиции лекарственных трав, которая при включении в состав липидных тоников для домашнего и профессионального использования, обеспечивает заданный фармакотерапевтический эффект;

-разработана  биотехнологияполучениялипидных  тониковдлядомашнего  ипрофессиональногоуходов за проблемной кожей;

-установлено,  чтоувеличениеконцентрации  фитокомпозициивсоставе  тоников в 2разаповышает  егопротивовоспалительныедействие,  на12 %,ранозаживляющееи  пролонгированноедействиена  15,5 %;

-доказано,  что комплексноеприменениелипидных  тониковилипосомальногокрема  дляпроблемнойкожи  увеличиваетэффективностьдействия  тоникапримернона12 %.

ГЛАВА 4.РАЗРАБОТКА СИСТЕМЫ УПРАВЛЕНИЯ КАЧЕСТВОМ ЛИПИДНЫХ КОСМЕТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ

(результаты собственных исследований)

4.1. Изучение причины несоответствиякачества продукции требованиям нормативной документации

В настоящее время сохранение и укрепление здоровья общества является одним из приоритетных направлений деятельности государства в области социальной политики. Решение этой проблемы сопряжено с эффективным развитием рынка косметической продукции.  Данный рынок является одним из наиболее устойчиво и стабильно развивающихся сегментов экономики страны. В нем утвердились новые формы собственности, появилась конкурентная среда.

Право утверждения НД отдано руководителю предприятия-производителя. При этом изготовители парфюмерно-косметической продукции при разработке технических условий на новые товары, как правило, стремятся уменьшить количество регламентируемых показателей качества. Вследствие чего на рынок поступает масса фальсифицированных и низкокачественных товаров широкого потребления. Несовершенство отечественного законодательства способствует этому. Достаточно сказать, что на данный момент производители косметических средств и контролирующие их органы в своей деятельности руководствуются требованиями СанПиН 1.2.681-97, срок действия которого истек в 2000 году.

В Испытательный центр ФГУ «Ставропольский ЦСМ» за последние три года поступило 190 образцов косметической продукции,10% из которых забраковали. Нами были изучены причины отказа в выдачи сертификатов соответствия парфюмерно-косметическим препаратам   в Ставропольском крае за 2001-2003 год. Установлено 6 основных показателей, по которым была забракована косметическая продукция (рисунок 13) .

                           % отказов

                         

                                                               1              2          3          4             5          6

Показатели несоответствия качества НД

Примечание: Ряд 1 - несоответствия органолептических показателейпродукции требованиям НД,

Ряд 2 -   несоответствие по бактериологической чистоте;

Ряд 3 - несоответствие по физико-химических показателям;

Ряд 4 - несоответствие состава продукциизаявленному составу на этикетке;

Ряд 5 - несоответствие по токсичности исследуемой продукции ;

Ряд 6 - несоответствие по раздражающему и аллергизирующему действию.

Рисунок 13 -Структура причин отказов выдачи сертификатов парфюмерно-косметических препаратов в органах по сертификации Ставропольского края за 2001-2003 г.г.

Как показал анализ работы предприятий края, причинами неудовлетворительного качества косметической продукции стали, в основном, низкое качество сырья и несоблюдение правил санитарной подготовки производства. В связи с чемособоевнимание мы уделили методам и контролю качества санитарной подготовки помещений, контролю качества сырья и полупродуктов, а также разработке методов стандартизации готового продукта.

4.2.Разработка программымониторинга производства липидных косметических препаратов

4.2.1. Контроль качества санитарной подготовки производства

От качества парфюмерно-косметической продукции, напрямую зависит безопасность здоровья потребителей. Поэтому авторы считают целесообразным рекомендовать для мониторинга производственной среды косметических средств адаптировать санитарные правила СП 3.3.2.015 «Производство и контроль медицинских иммунобиологических препаратов для обеспечения их качества», утвержденные постановлением Госсанэпиднадзора РФ №8 от 12.08.94г., которые предусматривают микробиологический контроль воздуха рабочих зон, поверхностей помещений и оборудования, рук и одежды персонала. При этом в стандарты производства целесообразно рекомендовать ввести показатели чистоты идентичныеаналогичным значениям для не стерильных лекарственных препаратов.

Основной целью данного мониторинга является постоянная гарантия стабильности асептических условий производства косметических средств, выявление начальных отклонений и выработка корректирующих действийдо возникновения ситуаций, приводящих к появлению загрязненной микроорганизмами и/или грибамипродукции. Метод контроля стерильности готового продукта основан на выборочном исследовании части серии и не дает полной гарантии чистоты и безопасности всей продукции в целом. Поэтому необходимо проводить промежуточные тесты на стерильность препарата в процессе производства, а также качественный и количественный контроль асептических условий. С нашей точки зрения, текущий контроль в принципе не может и не должен выявить или подсчитать все микроорганизмы, присутствующие в рабочей зоне. Он может только показать, что все этапы технологического процесса работают в соответствии с установленным уровнем чистоты и лимиты бактериальной нагрузки не превышены.

Программа мониторинга санитарного состояния производственной среды должна включать:

- оценку чистоты приточного в помещение воздуха;

- оценку качества санитарной подготовки поверхностей помещения рабочей зоны, оборудования, рук и одежды персонала, занятого в производстве;

- контроль  здоровья обслуживающего персонала.

Персонал, выполняющий программу мониторинга должен быть компетентен в соответствующих научных дисциплинах, адекватно обучен, иметь необходимые навыки и полномочия. Периодичность и протоколы мониторинга должны утверждаться руководством предприятия. Данные мониторинга следует учитывать для совершенствования практики уборки и дезинфекции рабочих помещений, оборудования и спецодежды.

     Согласно требованиям GMP (GoodManufacturingPractice), для очистки воздуха, подаваемого в производственные помещения класса чистотыD  необходимооборудовать систему кондиционирования приточного воздуха, которая обеспечивает соответствующую степень очистки воздуха от механических частиц и микроорганизмов. Система автоматически регулирует климатические параметры (температуру и относительную влажность воздуха), имеет аэродинамическую устойчивость для поддержания оптимального распределения давления и других параметровв здании и его отдельных помещениях, что исключает возникновение статического электричества и связанного с ним накопления пыли.

          Санитарная подготовка. Санитарную обработку технологического оборудования, инвентаря, тары рекомендовано нами проводить ежедневно, применяя моющие дезинфицирующие средства.Поверхности оборудования и стен, окрашенные масляной краской, моют горячим растворомнейтрального моющего средства типа «Федора» (20 мл на 10 л воды). Состав средства неагрессивен, не содержит щелочей и растворителей, применяется с водой любой жесткости. Средство «Федора» можно использовать как с теплой, так и холодной водой.Рекомендуемая концентрация моющего средства – 0,5 %. Перед генеральной уборкой помещение освобождают от персонала. Пыль с поверхности столов, окон, стен, оборудования и инвентаря протираютдезинфицирующим раствором.Влажную уборку проводят 1 раз в смену. После уборки, включают потолочные дезинфицирующие лампы не менее чем на 1 час. После однократного применения, уборочный материал обезвреживают замачиванием в 5 % осветленном растворе хлорной извести на срок не менее 2-3 часов, затем его ополаскивают в воде, сушат на воздухе и  используют повторно. Все работы проводят в очках, резиновых перчатках и фартуке.

Подготовка оборудования. Перед началом технологического процесса рекомендуемпроверить отсутствие в емкостях продукта от предыдущей серии, исправность аппаратуры, заземление. Перед загрузкой каждой серии продукта технологические емкости  моют, меняют фильтровальные приспособления. Периодическая чистка и дезинфекция оборудования должна производитьсяпосле каждой технологической операции   с применениемдезинфицирующего раствора, с последующей промывкой теплой и холодной дистиллированной водой.

Работа с персоналом. Люди, занятые в производстве косметических средств, должны проходить ежегодное медицинское освидетельствованияи бактериологическое обследование в соответствии с «Инструкцией по проведению  обязательных профилактических и медицинских обследований лиц, поступающих на работу» (Приказ МЗ СССР № 700 от 1984 г.). Одним из источников загрязнения готового продукта микроорганизмами являются дыхательные пути, волосы и кожные покровы работников. Поэтому  персоналурекомендуется мыть голову 1-2 раза в неделю, носить короткую стрижку, запрещается носить бороду и усы.

              Строго должен ограничиваться свободный вход в производственные помещения во время технологического процесса и выход из них. Следует ограничить перемещение и хождение в помещениях. О каждом заболевании работников (кожные, простудные, порезы, нарывы) необходимо ставить в известность мастерадля принятия решения осанитарной обработке   рабочего места заболевшего.   В качестве спецодежды впомещениях класса чистоты Dиспользуют  комбинезон, куртку и брюки или халат; шапочку или косынку из хлопчатобумажных или льняных тканей; соответствующую обувь или бахилы, одеваемые сверху на обувь (переходная одежда). Перед началом работы в гардеробной рабочие снимают верхние личные вещи, которые находятся в индивидуальном шкафчике. В боксе технологи и рабочие надевают спецодежду, которую стирают не реже двух раз в неделю специальным дезинфицирующим раствором. Высушенную технологическую одежду гладят утюгом с двух сторон или выдерживают в течение 60 минут под бактерицидной лампой.

                Подготовка тары. Первым этапом подготовки тары является мойка полиэтиленовых флаконов и крышек дезинфицирующим раствором. После споласкивания тары ее замачивают в емкости на 30-35 мин в 0,5% растворе хлорамина. Обеззараженные флаконы споласкивают дистиллированной водой и сушат в полочном сушильном шкафу. Блок- схема стадии представлена на рисунке 14:

Флаконы пэт

СМС

Вода питьевая

Хлорамин

Процесс мойки крышек и флаконов

                                                               

Процесс дезинфекции

Процесс сушки

                                                                   .                                                                                  

                                               Флаконы на стадию фасовки

Рисунок 14 -Блок-схема стадии подготовка тары

Мониторинг санитарной подготовки. Для достижения соответствующей микробиологической чистоты на предприятии необходимо определить критические производственные зоны, то есть локальные зоны асептического производства, в которых совершаются асептические манипуляции с продуктом, асептический монтаж оборудования, операции фасовки, на которых продукт подвергается наибольшему риску контаминации. Необходимо также определить докритический уровень содержания микробов и механических частиц, дающий раннее предупреждение о возможном отклонении от нормальных рабочих условий производства. Установить критический уровень содержания микробов и механических частиц, требующий немедленного вмешательства и корректирующих действий, если он превышен.

При отборе проб на анализ следует руководствоваться требованиями ГОСТ 29188.0-91 «Парфюмерно-косметические изделия. Правила приемки, отбор проб, методы органолептических испытаний» и ГОСТ 26668-85 «Продукты пищевые. Методы отбора проб для микробиологических анализов». Пробы липидных тоников для микробиологического анализа отбирают до отбора проб для физико-химических, органолептических и других видов испытаний с соблюдением правил асептики, для того чтобы исключить вторичное микробное загрязнение продукта. При испытаниях на стерильность отбирают не менее 10 единиц тоников в потребительской упаковке без следов повреждения, для других анализов – не менее трех упаковок в неповрежденной таре.

Методы и точки контроля

Воздухоочистка. Санитарная подготовка помещений и оборудования

Нами разработана блок-схема стадии контроля качества санитарной подготовки производства, представленная на рисунке 15.

Визуальный осмотр помещения и оборудования

Анализ воздуха

Санитарнаяподготовка производства

Санитарная подготовка технологической одежды

   

Анализ рН среды и остатков хлора

Санитарная подготовка тары

Микробиологический анализ

Рисунок 15 Блок-схема контроля качества санитарной подготовки производства

Контроль качества санитарной обработки помещения и оборудования проводят визуальным, химическим и микробиологическими методами.

Визуальный контроль. Ежедневно после текущей санитарной обработки проверяют степень чистоты поверхности стен и полов помещений,оборудования  подвергнутых обработке.Критерием удовлетворительного состояния оборудования и помещений является отсутствиевидимых загрязнений.

Анализ рН и остатков хлора. Наличие или отсутствие остаточной щелочности на оборудовании проверяют ежедневно с помощью индикаторной лакмусовой бумаги, для чего сразу после мойки к влажной поверхности участка оборудования, прикладывают полоску индикаторной лакмусовой бумаги. Удовлетворительным показателем является нейтральное значение рН.

Так как при санитарной обработке помещений и оборудования чаще всего используют дезинфицирующие растворы, содержащие хлор, то необходимо также производить контроль на полноту споласкивания от остатков хлора.             

Микробиологический контроль. Не реже 1 раза в 2 недели послесанитарной обработки рекомендуем проводить бактериологический контроль   помещений, оборудования и инвентаря. Смывы для контроля  КМАФАнМ (кое/см²) с оборудования, как правило, берут стерильным тампоном с поверхности 10*10 см. Общее количество проб при контрольных исследованиях одного маршрута мойки должно составлять не менее трех. Определение микробной обсемененности рабочего помещения, технологического оборудования и специальной одежды работников НПО «Пульс» мы проводили 1 раз в 2 недели в течение трех месяцев. Результаты анализа подтвердили допустимое содержание микроорганизмов в рабочем помещении, на оборудовании испецодежде персонала при условии выполнения вышеперечисленных операций.

         

Контроль качества исходного сырья

Наиболее значимым сырьем для конструирования липидных косметических препаратов являются лекарственные растения, растительные масла, родниковая и дистиллированная вода.Нами разработанаблок-схема контроля качества сырья (рисунок 16).

Стадии технологического процесса Контроль качества природной родниковойи дистиллирован- ной воды Методы и точки контроля

Анализ ионного состава Микробиология Анализ металлов Радиоактивность

Подготовкародниковой и дистиллирован- ной воды

    

Контроль качествалекарственных растений

Подготовкалекарственных растений

Анализ жирно-кислотного состава

Подготовка растительногомасла

Контроль качества растительного масла

Подлинность Анализ зараженности Радиационныйконтроль Определение содержания тяжелых металлов Обнаружение биофлавоноидов и каротиноидов

                                             

Рисунок 16 - Блок-схема контроля качества сырья

Анализ родниковой и дистиллированной воды проводили по   содержанию в воде тяжелых металлов,радионуклидов, а также микробиологических загрязнений. Безопасность воды в эпидемиологическом отношении определялась по микробиологическим и паразитологическим показателямв соответствии с требованиями СанПиН 2.3.2. 1078-01с дополнениями и изменениями   № 2. Определение общего количества бактерий в исследуемойводе проведено согласно требованиям ГОСТ 18963-73. Итоги микробиологического исследования родниковой воды представлены в таблице 10.

Таблица 10 -Итоги микробиологического исследование  воды родника

г. Ставрополя

Показатели	Единицы измерения	Нормативы по ГОСТ18963-73	Результаты
1	2	3	4
Общие колиформные бактерии	Число бактерий в 100 мл	Отсутствие	Отсутствие
Колифаги (фекальные)	Число бляшкообра- зующих единиц (БОЕ) в100 мл	Отсутствие	Отсутствие
Общее микробное Число	Число образующих колонии бактерий в 1 мл	Не более 100	Менее 100
Pseudomonas aeruginosa	Числ бактерий в 1 мл	Отсутствие	Отсутствие

Анализ содержания металлов в воде. Тяжелые металлы аккумулируются в организме. Поэтому в НД устанавливаются их предельно-допустимые концентрации. Исследование на содержание в воде тяжелых металлов, проводились в соответствии с требованиями МУ5178-90 и ГОСТ 30178. Полученные данные приведены в таблице 11.

Таблица 11 - Содержание тяжелых металлов в  родниковойи в дистиллированной воде

Показатели	Единицы измерения	Нормативы, по ГОСТ 30178	Результаты в родниковой воде	Результаты в дистиллированной воде
1	2	3	4	5
Массовая доля свинца	Микрограммкг	0,01	Менее 0,01	0,005
Массовая доля ртути	Микрограммкг	0,01	0,003	0,005
Массовая доля кадмия	Микрограммкг	0,005	Не обнаружено	Не обнаружено

Радиационная безопасность воды определялась по ее соответствию нормативам   показателей общей a - и b- активности в соответствии с требованиями Сан Пин2.3.2. 1078-01с дополнениями и изменениями   № 2 с применением «толстослойных» счетных образцов, приготовленных   путем выпаривания воды.    Особенно важно было определить данный показатель для родниковой слабоминерализованной воды, взятой из природного источника в селе Татарка близ города Ставрополя. Измерениеальфа и бета радиоактивности проводили на радиометрес использованием программно-аппаратурного комплекса «Прогресс», регистрирующем излучения. Итоги исследования представлены в таблице 13 .

Таблица 12 - Данные по измерению радиационной активности дистиллированной и родниковой воды г. Ставрополя

Показатели	Единицы измерения	Нормативы	Результаты в родниковой воде	Результаты в дистиллированной воде
1	2	3	4	5
a – радио- активность b-радио-активность	Беккерельл Беккерель/л	0,1 1,0	Менее 0,1 Менее 1,0	Менее 0,1 Менее 1,0

Установлено, что слабоминерализованная родниковая и дистиллированная водапо параметрам качества и безопасностиудовлетворяют требованиям стандартов, что дает возможность применения их для производствалипидных косметических средств.

Анализ растительного масла для производства  липидных препаратов

Определение жирно - кислотного состава растительных масел, применяемых в производстве липосомальных косметических препаратов, проводили в соответствии с ГОСТ 30418-96, который распространяется на пищевые маслаи устанавливает методику определения массовых долей жирных кислот к их общему содержанию в триглицеридах масел. Для определения массовых долей жирных кислот проводили газохроматографический анализ метиловых (этиловых) эфиров жирных кислот, получаемых из триглицеридов.Метод применим в диапазоне массовых долей жирных кислот от 0,1 до 100 %.

В ходе исследования применялся хроматограф газовый лабораторный с пламенно-ионизационным детектором и программированием температуры. Приготовление метиловых (этиловых)эфиров кислот обычно производят следующим образом. Пробу испытуемого масла хорошо перемешивают. В стеклянную пробирку берут 2-3 капли испытуемого масла, растворяют  в 1,9 мл гексана. В полученный масленый раствор вводят 0,1 мл   метилата натрия в метаноле (этилата натрия в этаноле) концентрации 2 моль мл³ . После интенсивного перемешивания в течение 2 мин на лабораторном встряхивателе реакционную смесь отстаивают 5 мин и фильтруют через бумажный фильтр. Этот раствор используютдля анализа. При такой пробоподготовкехроматограмма, получаемая в ходе анализа недостаточно четкая, результаты расчетов приблизительные. Поэтому мы посчитали целесообразным усовершенствовать данную методику.

Экспериментально установили, что для получения более четких кривых на хроматограмме  необходимо увеличить до 0,1 мл пробу масла и до 1 мл количество метилата натрия.Полученную    смесь масла и реактивов перемешивали с помощью лабораторного встряхивателя в течение 5 мин, после чего на 10 мин помещали в термостат (40⁰-50⁰)С.Повышение температуры до 40-50⁰С способствует увеличению скорости образования метиловых (этиловых) эфиров кислот. Реакционную смесь фильтровали через бумажный фильтр и проводили газохроматографический анализ. При этом получили более четкие изображения кривых и, соответственно, более достоверные расчетные данные.

Вычисление массовых долей жирных кислот (к сумме жирных кислот триглицеридов масла) проводили по ГОСТ 30418.Площадь пика компонентаS _i, мм² , вычисляли по формуле:

S _i=   h _i xa _I   (13),

   где   h_i    -высота пик, мм;

                   a _i    -ширина, измеренная на половине высоты, мм.

Массовую долю каждой жирной кислоты масла Х_i     вычисляли по формуле:

Х_{i =} S _i х 100       (14),

å_iS_i

где S _i  - площадь пика метилового (этилового) эфира, мм²;

å_iS _i     -сумма площадей всех пиков на хроматограмме, мм².

Полученные данные свидетельствовали о том, что результаты хроматограммыстали более четкими и достоверными. Практическая оценка и критический опыт применения стандартной методики в совокупности с внесенными изменениями показали, что сократилась на 2,5 часа скорость реакции анализа.

С целью выбора растительных масел для производства липидных препаратов представляло интересным выяснить содержание незаменимых жирных кислот в подсолнечном масле различных производителей. Нами были проведены исследования жирно-кислотного состава  растительных масел следующих крупных предприятий: ЗАО «Невинномысский маслоэкстракционный завод»; ООО «Луч», г. Ставрополь; ОАО «Молочный комбинат Ставропольский»; ООО «Маслозавод№3», с. Александровское. Анализбыл проведен на основеоптимизированного метода. Полученные результаты приведены в таблице 13.

Таблица 13 - Содержание незаменимых жирных кислот в нерафинированном подсолнечном масле, произведенном в Ставропольском крае

Наименование эссен- циальных жирных кислот	Массовая доля жирных кислот,%
По ГОСТ	Заводы – производители
ЗАО «Невинномысский маслоэкстракционный завод»	ООО «Луч»	ОАО «Молочный комбинат «Ставро- польский»	ООО «Маслозавод№3»
1	2	3	4	5	6
Линолевая С18:2	59,80	53,37±0,03	49,72±0,03	53,74±0,06	59,19±0,05
Линоленовая С18:3	0,20	0.10±0,02	1,19±0,02	0,20±0,01	0,22±0,05

               

Как видно из таблицы массовая доля незаменимых жирных кислот, содержащихся в подсолнечном масле различных заводов – производителей соответствует требованию ГОСТ. Однако масло ООО «Маслозавод № 3»,   содержит наибольшее количество эссенциальныхжирных кислот и может быть рекомендовано для производства косметической продукции. Усовершенствованный метод анализа позволил повысить чувствительность метода примерно в 10 раз и с точностью до сотых долей определить содержание жизненно важных для организма жирных кислот.

Контроль качества лекарственного   растительного сырья

Основным источникомБАВ в липидных косметических препаратах являются лекарственные растения. Пробу для  проведения испытаний растительных лекарственных средств отбирали в соответствии с ГФ Х1 , применяемой в фармацевтической отрасли.   Подлинность  лекарственных растений устанавливали по внешним признакам, размерам, цвету и запаху. Внешний вид сырья определяли визуально, рассматривая его элементы при помощи лупы. Так каксырье в сухом виде было смятым, то предварительно его замачивали, погружая на 2-3 минуты в горячую воду.Цвет определяли визуально при дневном освещении. Запах анализировали органолептически, сначала не изменяя состояния сырья, затем растирая его между пальцами. Проведенные исследованияподтвердили подлинность используемых нами лекарственных растений для производства липидных тоников для проблемной кожи.

     Зараженность амбарными вредителями определяли с помощью лупы. Для этого пробу помещали на сито с отверстиями 0,5 мм и просеивали. Визуальным осмотром не было обнаружено амбарных вредителей. Примесей различного характера также не удалось обнаружить в растительном сырье.

Определение содержания радиоактивных и тяжелых металлов. В сырье нормируется содержание техногенного происхождения, в первую очередь стронция –90 и цезия –137, образующихся приделении тяжелых ядер, таких какуран и плутоний. Исследования проводили в соответствии требованиями ОФС 42-001-03.

Определение цезия-137 при экспонировании счетного образца 1800с проводили с использованием аттестованной геометрии – сосуда Маринелли. Анализ на содержание стронция-90проводили ваттестованной геометрии – кювете.Результаты техногенного происхождения лекарственных растений, приведенные в таблице 14, свидетельствуют осоответствии  содержания радионуклидов в лекарственных травахустановленным нормативам, указанным в СанПиН 2.3.2.1078-01 с дополнениями и изменениями № 2.                                                                                          

                                                                                                                          

Таблица 14 - Содержание радиоактивных металлов вфитокомпозиции тоников

Показатели	Единицы измерения	Нормативы ГФ Х1	Результаты
1	2	3	4
Содержание цезия –137	Беккерелькг	100	Менее 5
Содержания стронция- 90	Беккерелькг	150	Менее 24

Исследование на содержание в фитокомпозиции тяжелых металлов проводили с помощью атомно-адсорбционного спектрофотометра по МУ  5178-90 и ГОСТ 30178. Измеренная оптическая плотность была прямо пропорциональна концентрации элемента в пробе. Полученные данные приведены в таблице 15. (СанПиН 2..3.2. 1078-01).                                                                                                  

                                                                                          

Таблица 15 -содержание тяжелых металлов в  фитокомпозиции тоников

Массовая доля элемента	Единицы измерения	Предельно-допустимые концентрации	Результаты
1	2	3	4
Свинца	Микрограммкг	0,1	0,01
Ртути	Микрограммкг	0,3	0,04
Кадмия	Микрограммкг	0,05	отсутствует

Полученные данные свидетельствуют о том, в разработанной для липидных тоников фитокомпозиции,содержание тяжелых металлов в 10 раз меньше нормативных ПДК.

Определение содержания БАВ. Лекарственные травы были проверены на содержания биофлаваноидов и каротиноидов, которые определяют противовоспалительные и бактерицидные свойства готового продукта. Для качественного определения флавоноидов в используемом сборе лекарственных растений использовали цианидиновую реакцию (восстановление цинковой пылью в кислотной среде). Флавоноиды при восстановлении магнием или цинком в присутствии концентрированной хлористо-водородной кислоты образуют красное окрашивание. Реакция очень чувствительна и основана на восстановлении карбонильной группы с образованием антоцианида. Сущность метода: 1 г порошка сырья заливаем 10 мл 95% раствора этилового спирта, нагреваем на водяной бане до кипения и настаиваем 3-4 ч. Спиртовое извлечение фильтруем, упариваем до объема 2 мл и делим на 2 пробирки. В каждую пробирку прибавляем по 3 капли концентрированной хлористо-водородной кислоты. В 1-ю пробирку добавляем 0,03-0,05 г цинковой пыли и нагреваем на водяной бане до кипения. Жидкость окрашивается в красный цвет, что свидетельствует о наличии флавоноидов в исследуемом растворе. Во 2-й пробирке окрашивание должно отсутствовать. Опыты проводились нами на каждое ЛРС отдельно и  на сбор не менее, чем по 5 раз на каждый. В результате получали стойкое красное окрашивание.

Для идентификации каротиноидов использовали реакцию с хлороформным раствором сурьмы хлорида, в ходе которой развивается сине-зеленое окрашивание. К 2 мл экстракта из сухого препарата добавляли 2 мл сурьмы хлорида. В результате пятикратного опыта наблюдалось непременное зеленое окрашивание, свидетельствующее о наличии каротиноидов в растворе экстракта.

Контроль качество полупродуктов

Наиболее важными полупродуктами, которые определяют качество липидных препаратов являются экстракты лекарственных растениях. Нами разработана блок-схемаконтроля качества фитоэкстрактов (рисунок 17).

Промежуточные стадии производства

Контроль качества

Методы и точки контроля

Получение           экстрактов         фитокомпозиции	Определение степени микробиологической безопасности и бактериостатическое действие на патогенный стафилококк
	Определение массовой доли экстрагируемых веществ
	Определение перекисного числа

Рисунок -   17Блок – схема контроля качества фитоэкстрактов

Микробиологическое исследование фитоэкстрактов проводили на пиогенном стафилококке совместно с доктором медицинских наук В.Н.Савельевым. Анализыпроводили в соответствии с требованиями Государственной фармакопеи ХI издания: «Методы микробиологического контроля лекарственных средств (ГФ ХI, 2002, вып.2., с. 187) . Сущность метода заключается в определении степени микробиологической безопасности приготовленных растительных препаратов из вышеназванных лекарственных трав с последующим изучением бактерицидного иили бактериостатического действия их на патогенный стафилококк. В ходе исследования использовали референтный штамм Staphylococcus aureus 209Р, предоставленный лабораториейСтНИПЧИ. За что авторы выражают глубокую благодарность директору института, заслуженному деятелю науки РФ, профессору В.И.Ефременко.

Отсутствие роста колоний МАФАнМ, а также других микроорганизмов на плотных питательных средах указывало на стерильность испытуемых препаратов. Наличие роста не более чем 10³ КОЕ МАФАнМ в 1 мл экстрактов лекарственных трав в интактной форме при отсутствии роста дрожжей, дрожжеподобных и плесневых грибов, бактерий семейства Enterobacteriaceae, патогенных стафилококков, палочек Pseudomonas aeruginosaдоказывало микробиологическую безопасность применения испытуемых препаратовв процессе производства.

В ходе проведения эксперимента нами получены данные о том, что приготовленныеэкстракты лекарственных трав в интактной форме по своим микробиологическим показателям соответствуют требованиям СанПиН 1.2.681-97 и являются безопасными для использования их в процессе производства липидных косметических средств.

Определение содержание экстрактивных веществ.Для определения количества БАВ в экстракте аналитическую пробу сырья измельчали и просеивали сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм. Затем отбирали навеску массой 1 г, которую помещали в коническую колбу, приливали 50 мл 40 %  водного раствора этилового спирта. Колбу закрывали и взвешивали с погрешностью не более 0,01 г и оставляли на час. Затем колбу соединяли с обратным холодильником, нагревали до кипения и выпаривали легколетучие вещества в течение 2 часов. После охлаждения колбу с содержимым вновь закрывали пробкой, взвешивали и потерю масс дополняли40 % водно-спиртовым раствором. Содержимое тщательно взбалтывали и фильтровали через бумажный фильтр в сухую колбу, вместимостью 200 мл. Далее 25 мл фильтрата пипеткой переносили в фарфоровую чашку, сушили при температуре 100-105⁰С в течение 3 часов, затем охлаждали в течение 30 мин в эксикаторе. Полученную массу взвешивали и рассчитывали массовые доли экстрактивных веществ. Результаты расчетовприведены в таблице 16.

                                                                                                

Таблица 16 – Массовые доли биологически активных веществ в фитокомпозиции

Название показателя	Значение результатов экстракции
Первая серия	Вторая серия	Третьясерия	Четвертая серия	Пятая серия
1	2	3	4	5	6
Массовая доля экстрактивных веществ, %	30±2, 4	33±2,6	31±2,4	29±2,1	34±2,7

Результаты исследований свидетельствуют, что массовая доля БАВ в растворе экстракта составляет от 29 до 36 %, т.е. среднее значение массовой доли составляет 31,4± 2,4 %.

Определения перекисного числалипидов. Перекисное окисление липидов является одной из основных причин, вызывающих повреждение биологических мембран и может быть инициировано целым рядом факторов, таких как  излучение,свободные радикалы и т.д. Нами была адаптирована методика определения перекисного числа в пищевых растительных маслах для определения этого показателя в полупродуктах и готовой продукции липидного косметического производства. Для определения перекисного числа было исследовано: масло из семян подсолнечника, продукты переработки маслоэкстракционного завода (фосфатиды),липосомальный крем для проблемной кожи, а также липосомальный противоожоговый гель «Фиталон».        Результаты исследования приведены в таблице 17.

Таблица 17 - Показатели перекисного числа в сырье илипидных косметических средствах

Наименова ния исследуемо го образца	Свеже приготовлен-ный продукт	через 6 месяцев	через 12 месяцев	через 18 месяцев
перекисное число, ½O ммоль/ кг	ПОЛ	Перекис ное число ½O ммоль/кг	ПОЛ	перекисное числа ½O ммоль/ кг	ПОЛ	Перекис ное число ½O ммоль/кг	ПОЛ
1	2	3	4	5	6	7	8	9
Раститель ное масло	3,5±0,1	17,4±1,2	5,4±0,4	25,6±1,3	6,1±0,2	29,4±1,3	8,7±0,1	31,7±1,4
Фосфатиды	7,8±0,3	41,1±2,7	8,1±0,1	61,2±2,2	8,9±0,3	63,1±2,0	10,8±0,1	69,5±2,8
Крем для проблемной кожи	5,5±0,3	36,7±1,8	5,9±0,4	48,2±1,9	7,2±0,2	50,5±1,9	8,9±0,1	57,3±2,0
Гель «Фиталон»	4,7±0,2	29,1±1,6	5,2±0,4	31,4±1,5	5,8±0,1	36,9±1,7	6,7±0,3	41,2±1,7
Тоник для проблемной кожи	0,0	0,0	0,0	0,0	0,0	0,0	0,0	0,0

Сущность метода определения перекисного числа: в колбе   плоскодонной с притертой пробкойвзвешиваем испытуемый образец массой от 1,5 до 2г, при необходимости растворяя его на водяной бане. Затем в колбу приливаем 10 мл хлороформа и 15 мл уксусной кислоты, закрываем пробкой и тщательно перемешиваем. К полученному раствору приливаем 1-1,5 мл йодистого калия свежеприготовленного.После перемешивания в колбу добавляем 75мл бидистиллированной воды и1,5 мл    1 %раствора крахмала (вметодике рекомендуемой в пищевой отрасли прибавляют 3-5 капель крахмала). Крахмал  в данном опыте служит индикатором. Авторами экспериментально установлено, что   его количество меньше 1,5 млв 20% случаев не дает качественного окрашивания. Увеличение количествакрахмала делает реакцию более чувствительной. Окрашенный в синий цвет раствор титруем 0,01н раствором тиосульфата натрия до исчезновения синего окрашивания. Установлено, что значение перекисного числа и ПОЛ увеличивается со сроком хранения препарата. Соответственно по данному показателю можно определять срок хранения косметических липосомальных средств.

Фосфатиды обладают большим перекисным числом и ПОЛ по сравнению с  кремами и гелями, что связано с введением в рецептуру консервантов. Наименьшее перекисное число, а также ПОЛ и, соответственно, выше антиоксидантные свойства у противоожогового геля «Фиталон» и крема для проблемной кожи. Перекисное числои ПОЛ липидного тоника не удалось обнаружить, что доказывает его антиоксидантные свойства, которые усиливаются содержанием спирта этилового. Полученные данные нагляднодоказывают объективность показателя перекисного числа, характеризующего процесс окисления липидов и возможность внесения именно этого показателя в НД липосомальных препаратов.

Анализ качественного и количественного содержания липидов подробно описан в 3 главе.

Контроль качества готового продукта

Авторами разработана схема стандартизации липидных тоников для проблемной кожи.

	Методы и точкиконтроля

Стадия производства

Получение липидных тоников Фасовка Хранение

Органолептических исследование

Физико-химическое исследование

Микробиологи- ческий контроль

			Контроль качестваготового косметического продукта

                                                                              

Токсикологическое исследование

Определение сроков хранения

Рисунок18-   Блок-схема контроля качества готового липидного продукта

                 Для проверки соответствия липидных тоников требованиям стандарта проводили приемосдаточные (внешний вид, цвет, запах, объемная доля этилового спирта, водородный показатель рН)и периодические испытания (массовая доля суммы тяжелых металлов и микробиологическая чистота).

Определение органолептических показателей проводили в соответствии с требованиями ГОСТ 29881.0, принимая во внимание параметры, указанные в ТУ. Внешний вид исследовали просмотром пробы в количестве около 20-30 мл в стакане на фоне листа белой бумаги в проходящем или отраженном свете.

           Объемную долю этилового спирта в однородной косметической жидкости определяли по плотности с помощьюареометра в соответствии с ГОСТ 3639иГОСТ 14618.10с последующим пересчетом в объемную долю этилового спирта.

Массовую долю суммы тяжелых металлов определяли атомно-адсорбционным методом в соответствии с ГОСТ30178и МУ 5178-90, описанным ранее.   Результаты стандартизациилипидного тоника для домашнего ухода за проблемной кожей приведены в таблице 18.

Таблица 18 - Исследование показателей качества и безопасности тоника

Наименование показателя	Норма по ГОСТ Р. 51579-2000	Норма по НД разработанной авторами	Результаты исследований
Внешний вид	Однородная однофазная жидкость без посторонних примесей	Однородная однофазная жидкость без посторонних примесей	Соответствует.
Цвет	Свойственный цвету изделия данного наименования	Согласно ТУ от желтогодо светло-зеленого цвета	Соответствует.
Запах	Свойственный данному изделию	Согласно ТУ Травяной	Соответствует.
Объемная доля этилового спирта, %	0,0-75,0	3,3-3,7	3,5±0.1
Водородный показатель рН	1,2-8,5	3,4–3,8	3,6 ± 0,1
Массовая доля суммы тяжелых металлов	0,002	0,002	Менее 0,002

Определение кислотного показателя. Водородный показатель рН в косметических жидкостях определи по ГОСТ 29188.2.  

              Все полученные за последнее время данные указывают на то, что за исключением некоторых участков, где по физиологическим причинам наблюдаются более высокие значения pH. Кним относятся подмышечные впадины, генитально-анальные и межпальцевые участки, называемые "физиологическими разрывами в кислотной оболочке", поверхность кожи обладает кислотными свойствами.

Для введения в нормативную документацию показателя кислотности липидных тонизирующих препаратов необходимо было изучить влияние данного параметра на рН кожного покрова.    Намипроводились исследования рН кожи с помощью анализа смывов на рН- метре при участии добровольцев- волонтеровв течении 15 дней. В испытания приняли участие 11 мужчин и 15 женщин с проблемным типом кожи в возрасте от 16 до 50 лет. Результаты изучения изменениярН кожи  во временипосле нанесения тоника представлены в таблице 19 .                 

Таблица 19 - ЗначениерН кожи у женщин и мужчин после нанесения тоника для проблемной кожи       

Значение рН кожи после нанесения тоника
Возрастная группа женщин	Чистой Кожи	Через 30 секунд	через 5 мин	через 10 мин	через 20 мин
1	2	3	4	5	6
У мужчин
16-22 года	4,7±0, 1	4,6±0,4	4,9±0,0	5,2±0,3	5,7±0,5
22-35 лет	5,1±0,3	4,6±0,4	5,1±0,1	5,4±0,4	5,2±0,2
35-50 лет	6,5±0,3	5,6±0,2	5,7±0,4	5,9±0,5	6,5±0,1
У женщин
16-22 года	4,7±0,3	4,0±0,4	4,1±0,3	4,2±0,1	4,7±0,3
22-35 лет	6,0±0,5	5,1±0,1	5,3±0,0	5,5±0,2	5,9±0,5
35-50 лет	7,1±0,4	6,1±0,1	6,2±0,2	6,4±0,1	7,1±0,2

         

          Как видно из таблицы,у мужчин более кислая среда кожи, чем у женщин. И, как следствие,  кожа мужчин реже подвергается воспалительным процессам. В юношеском возрасте (16-22 года) рН чистой кожи у мужчин и женщин имеет примерно равные значения. С возрастом уменьшается значение кислотности, рН приближается к нейтральной среде.

           Установлено, что через пять и десять минутпосле нанесения тоника кислотность сосмывов кожиувеличивается соответственно на 4% и 9%, ачерез 20 минут рН приближаетсяк исходному показателю, что свидетельствует о способности кожи нейтрализовать рН наносимого вещества. Тем не менее, для гарантии бактерицидного действия тоников, считаем целесообразным внести в нормативную документацию значение рН , равное 3,5 ± 0,2, так как именно эта кислотность обеспечиваетнеобходимую бактерицидность тоника. Исследования на волонтерах, проведенные в ЦентреКрасоты «Альпика» г. Ставрополя доказали, что повышение рН выше значения 3,7 ухудшают микробиологические показатели смывов коживолонтеров. Понижение значения рН усиливает сухость и шелушение кожи.

                  Микробиологический контроль. Метод определения количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов основан на высеве продукта всреду агара, инкубировании посевов   и расчете всех выросших видимых колоний. Полученные данные свидетельствуют о микробиологической чистоте готового продукта.

Токсикологическую безопасность тоника установили, изучая его действияс использованием белых беспородных крыс-самок  массой 150-180 г, что была описано ранее в главе 3.

         Клинические исследования тоника были проведены в дерматологическом кабинете  поликлиники № 9 в течение месяца на 30 женщинах в возрастеот 14 до 55 лет. Тоник предварительно наносили на предплечье волонтеров на 15-20 минут.Ни в одном случае признаков раздражения и аллергии не отмечено.

Сроки хранения определялись естественным и ускоренным методами. В первом случае контрольные образцы хранили в закрытых тубах на складе, во втором случае – в полупрозрачных емкостях на свету при температуре 27± 5⁰ С.

Установлено, что тоник сохраняет свои органолептические, физико-химические и очищающие свойства в течение 18-20 месяцев. В НД нами внесен рекомендательный срок хранения 12 месяцев. Основой обоснования сроков годности является проведение микробиологических, физико-химический исследований, оценка органолептических свойств в процессе хранения. Сроки исследования продукции должны по продолжительности превышать предполагаемый срок годности, указанный в НД. Образцы для испытаний отбираются не менее, чем от 3 различных дат выработки. Основным критерием для положительной оценки обоснования сроков годности косметической продукции является отсутствие отрицательной динамики всего комплекса изучаемых показателей.

По результатам исследования показателей безопасности и качестватоника для проблемной кожинами было установлено соответствиеустановленным стандартам, что дало возможность для получения гигиенического сертификата и сертификата соответствия Госстандартав России.

4.3. Разработка   системы управления качеством производства липидных косметических препаратов

При разработки системы управления качеством нами учитывалисьвсе этапы жизненного цикла липидных тоников. На этапе маркетинговых исследований был изучен рынок тоников. Установлено, что в оптовую и розничную сеть краяпоступает 49 наименований тоников, в том числе 18 % отечественного производства. Липидные тоники составляют лишь 7% продукции, что свидетельствует о необходимости выпуска импортозамещающих товаров.В процессе закупок сырья и вспомогательных материалов предприятие, как правило, оценивает и выбирает поставщиков на основе их способности поставлять продукцию в соответствии с требованиями организации. Этими требованиями являются: оптимальное соотношение цены и качества, обязательность и пунктуальность при поставках, гарантированность доставки и т.д. Так, на пример, было установлено, что надежными поставщиками экологически чистых лекарственных трав на юге России являются совхоз «Васюринский» Краснодарского края иООО «Медифарм» Кочубеевского района Ставропольского края.

На этапе научных разработок была создана рецептура тоников, доказана с помощью биологической модели ее эффективность, разработан пакет нормативной документации: технические условия и технологический регламент на конструирование липидных тоников из природного сырья. Были отработаныи проверены параметры технологического процесса. Установлено, что процесс получения тоников необходимо вести 20-30 минут при температуре 18-19 ⁰С. На каждую технологическую операцию и все оборудование составлены и утверждены стандарты. Разработана программа учебы специалистов с целью освоения навыками и умением стабильного качественного проведения процессом производства.

Разработана программа мониторинга качества и оптимизированы методы контроля  санитарной подготовки, качества сырья, полупродуктов и готового продукта. Заключительным этапом проверки предложен приемочный контроль, по результатам которого проводится стандартизация  продукта. Определены условия фасовки и хранения, которые должныспособствовать сохранению качества товара от отгрузки ее изготовителем до получения конкретным потребителем.

На этапе распределения и реализации продукциисоздана подсистема закупкилипидных косметических средств оптовыми и розничными организациями. На этом этапе субъектом управления качеством становится персонал организации сферы услуг. Разработаны методические указания качественного обслуживания населения при реализации продукции.

На этапе эксплуатацииза качество отвечает потребитель. От того, насколько грамотно он будет использовать продукцию, зависит срок ее службы, поэтому на липидные тоники были разработаны подробные инструкции на применение товара самостоятельно и в сочетании с липосомальным кремом.

На стадии утилизации полимерных флаконов и туб после использования косметической продукции были рекомендованы методы их утилизации. Одновременно разработаны мероприятия по охранеокружающей среды, внедрены стадии улавливания легколетучих продуктов, технология комплексной переработки лекарственного растительного сырья.

Но на этом не рекомендовано заканчивать деятельность организации. Она должнапродолжать изучение потребности рынка липидных тоников, проводить маркетинговые исследованияс последующей разработкой новой продукции. Так возникнет новый виток  деятельности   в области качества – от этапа маркетинга до этапа утилизации.

В основу разработанной системылегли два подхода: управленческий и технологический (Парций Я.Е., 2003). Первый  подход базировался на требованиях стандартов ИСО серии 9000, принципах и методах менеджмента. В широком смыслеон охватил организационную структуру научно-производственного объединения, организационно-распорядительную документацию, производственные процессы и ресурсы для достижения целей в области качества и удовлетворения требований потребителя. Второй - предусмотрел использование эффективных методов для оценки стабильности производственных процессов, обеспечения достоверности результатов измерений, контроля и испытаний продукции. Подсистемы его нами разработаны более подробно в виде программы мониторинга качества на производстве липидных косметических средств.

Если предприятие выпускает высококачественную продукцию, то это свидетельствует о том, что руководство организации – производителя парфюмерно-косметической продукции выполняет свои обязательства в отношении разработки, внедрения системы менеджмента качества и постоянного улучшения ее результативности. На Ставропольском НПО «Пульс» это рекомендовано авторами достигатьпутем:

-  доведения до сведений сотрудников предприятияважности и необходимости выполнения требований потребителей к выпускаемой или реализуемой продукции, а также законодательных и регламентирующих положений по производству и реализации продукции;

  -обеспечения разработки целей в области качества;

- обеспечения предприятия необходимыми ресурсами для реализации установленных целей и задач в области качества;

- создания и поддержания в подразделениях предприятия благоприятных условий для повышения качества выполняемых работ.

Авторами было разработано Положение по управлению качеством на производстве трансдермальных косметических препаратов, обеспечивающее комплексный подход к мониторингу безопасности продукции. Особое внимание в разделе «Программа мониторингакачества» уделено ежедневной санитарной обработке технологического оборудования, инвентаря, тары с применением моющих и дезинфицирующих растворов, а также очистке воздуха, поступающего в рабочую зону. Под контроль рекомендовано взять проведение освидетельствования и бактериологического обследования   персонала, контактирующего с продукцией.

          Данная система принята к внедрению коллективом НПО «Пульс», который в настоящее время производит и реализует на отечественном рынке более 30 наименований липидныхкосметических препаратов. В 2003 году данное предприятие награждено правительством края дипломом «Лидер качества Ставрополья».

Таким образом, стабильность асептических условий производства и, соответственно, безопасность липидных косметических средств обеспечивается:

- соответствующим проектом производства и оборудования;

- адекватной системой воздухоподготовки (фильтрация, перепад давления);

- системой ведения документации (рабочие инструкции, протоколы контроля);

- надежным контролем технологического процесса;

- практикой качественного поддержания чистоты (уборка, дезинфекция);

- медосмотрами и эффективными программами обучения персонала;

- гарантией качества материалов и оборудования.

         На основании проведенных исследований нами разработан алгоритм системы управления качеством производства липидной косметической продукции, представленный на рисунке 19.

Система управления качеством производства липидных                               косметических препаратов

Создание системы маркетинговых исследований

Разработка стандартов инфраструктуры (помещение, оборудование и т.д.)

Организация работы с поставщиками сырья, вспомогательных  материалов, тары

Разработка методов и организация контроля качества на каждом этапе производства

Разработка НД(технологический регламент, ТУ)

Разработка методов и организация стандартизации продукции

Создание стандартов на каждую технологическую операцию и весь технологический процесс

Разработка системы реализации продукции. Работа с розничными и оптовыми покупателями

Организация работы с персоналом (медосмотр, обучение и т.д.)

Разработка системы работы   по установлению обратной информационной связив области качества продукции связи ( работа с профессиональными косметическими кабинетами)

Разработка правил по ТБ, промышленной санитарии

Организация НИОКР по созданию новой продукции

Приказы по созданию и утверждению  организационно-распорядительной документации накаждый этап системыпроизводства липидных косметических средств

Рисунок -  19   Алгоритм системы управления качеством производства липидных         косметических препаратов лечебно – профилактического действия

Данный алгоритмпозволяет оптимизировать научно-методические основы мониторинга качества и безопасности липидной косметическойпродукции в соответствии с международным стандартомсерии ИСО 9000 и повысить конкурентоспособность отечественных  предприятий за счет выпуска высококачественных товаров широкого потребления,способствующих безопасности здоровьяроссиян, ежедневно потребляющих данную продукцию.

                                              

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

              Исследования данной работы посвящены разработке состава и основных биотехнологических процессов приготовления липидных тоников для проблемной кожи, а также созданию системы управления качеством на производстве трансдермальных косметических препаратов.

              В качестве активного компонента в состав косметического средства введены:комплекс микро и макроэлементов природной родниковой воды и экстракты  лекарственного растительного сырья, эффективность которых подтверждена экспериментально. На биологической модели Staphylococcusaureus доказана целесообразность введения   в рецептурутоников фитокомпозиции, содержащей следующие соотношения ЛРС: по 4 части зверобоя и шалфея и по 1 части крапивы, календулы и ромашки.

Разработаны основные биотехнологические процессы, экспериментально определены оптимальные параметры отдельных стадий производства. Установлено, что экстракцию фитокомпозиции   целесообразно проводить 40%-ым раствором спирта этилового, циркулирующего через слой ЛРС, толщиной 1,5-2 см, при атмосферном давлении и комнатной температуре в течение 10-12 часов. Процесс получения самих тоников ведутпри температуре 18-19 С в течение 25-30 минут. Определено, что 40 % раствором спирта извлекается весь комплекс фосфолипидов растительного сырья в количестве в среднем 42,33 мгмл, что дает основание говорить о получении липидосодержащего косметического средства.Фосфолипиды способствуют   процессам  клеточнойрегуляциии  восстановлениюлипидныхпластов  вмежклеточномпространстве  кожи. Составлен материальный баланстехнологического процесса получения тоников из расчета на 100 кг готового продукта. Выход готового продукта составил - 93,83 %, общие потери – 2,84%. Разработанный технологический регламент производства тоников внедрен в практику работы Ставропольского НПО «Пульс».

Была изучена эффективность разработанных препаратов на лабораторных животных, как в индивидуальном, так и в сочетанном применении с липосомальным кремом, содержащимидентичную фитокомпозицию. Противовоспалительное действие тоника«ProfiLine» в сочетании с данным кремом на5,8 %  эффективнее   крема,на 43 %  самого тоника. Доказано эффективное ранозаживляющеедействие сочетанного применения тониковилипосомального  крема. Так, еслив контрольной группе животных, не получавших лечение, к концу эксперимента длина раны уменьшилась на 71,6%, а в группе животных, получавших тоник для домашнего ухода,  начиная с 10 дня, наблюдалась лишь незначительная тенденция к ускорению заживления ран, то полное заживление ран к 15 дню эксперимента наблюдали вгруппе  животных,которыхлечили  липиднымтоникомсерии  «ProfiLine»илипосомальным  кремомдляпроблемной  кожи. Определено, что разработанные тоники обладают не только бактерицидным, но и увлажняющим действием.

В связи с тем, что безопасность парфюмерно-косметической продукции имеет важный социальный и экономический аспекты, нами были изучены причины отказа в выдачи сертификатов соответствия данным средствам   в Ставропольском крае за 2001-2003 год. Установлено 6 основных показателей, по которым была забракована косметическая продукция. Это - несоответствие требованиям НД органолептических свойств, бактериологической чистоты, физико-химических показателей,  несоответствие состава продукции  заявленному составу на этикетке,  токсичность исследуемой продукции, ее  раздражающее и аллергизирующее действие.

Как показал анализ работы предприятий края, причинами неудовлетворительного качества косметической продукции стали, в основном, низкое качество сырья и несоблюдение правил санитарной подготовки производства. В связи с чемособое  внимание мы уделили методам и контролю качества санитарной подготовки помещений, мониторингу качества сырья и полупродуктов, а также разработке методов стандартизации готового продукта.

Наиболее значимым сырьем для конструирования липидных косметических препаратов являются лекарственные растения, растительные масла, родниковая и дистиллированная вода.Усовершенствованы методы контроля качества сырья, полупродуктов и готовых косметических липидных средств,приблизив их к фармацевтической отрасли. Установлена целесообразностьвведения в НД на сырьеметодов определение жирно-кислотногосоставарастительных масел, содержащих жирные эссенциальные кислоты.

Для введения в нормативную документацию показателя кислотности липидных тонизирующих препаратов нами было изучено влияние тоников на рН кожного покрова. Подтверждена способность кожи восстанавливать кислотность среды через 20-30 минут после нанесения косметических средств. Тем не менее, для гарантии бактерицидного действия тоников, ввели в нормативную документациюзначение рН, равное 3,5 так как именно этот показатель  обеспечивает бактерицидную активность.

На основании проведенных исследованийразработан алгоритм системы управления качеством производства липидной косметической продукции, который позволяет оптимизировать научно-методические основы мониторинга качества и безопасности липидной косметическойпродукции в соответствии с международным стандартом  серии ИСО 9000. На основании алгоритма составлено положение по управлению качеством на производстве трансдермальных косметических средств, внедренное в практику работыНПО «Пульс» г. Ставрополя.

Выпуск высококачественной парфюмерно-косметической продукции повышает конкурентоспособность отечественныхпредприятий и  способствует безопасности здоровья  россиян, ежедневно потребляющих данную продукцию.

Выводы

1. Разработаны основные биотехнологические процессы   конструирования оригинальных липидных тоников для очищения проблемной кожи. Определены параметры технологической стадии получения тоников (температура 18-19⁰ С и +время перемешивания 20-30 минут).

2. Подтверждена возможность использования биологической модели Staphylococcus aureus для разработки рецептуры фитокомпозиций с заданными терапевтическими свойствами. Экспериментально доказано, что целесообразно в рецептуру липидных тоников для проблемной кожи включать фитокомпозицию, в состав которой входят лекарственные растения в следующем соотношении: по 4 частишалфея,    календулы и по 1 частиромашки, травы зверобоя и крапивы.

Введение в состав тоников родниковойводы   обогащает готовый продуктмикро- и макроэлементами   и, соответственно, усиливает противовоспалительное и регенерационное действие тоников.

3. Показана необходимость комплексного ухода за воспаленной кожей липидными тониками в сочетании с липосомальным кремом для проблемной кожи. Установлено, что противовоспалительное действиетоника серии «ProfiLine» в сочетании с липосомальным кремомна 5,8 % выше индивидуального действия   крема, и на 43%выше эффективности самого тоника.

4. Впервые разработана система управления качеством на производстве липидных косметических препаратов. В нормативную документациювведены дополнительные показатели   контроля качества липидного сырья: жирно-кислотного состава и перекисного числа. Срок хранения липидных препаратов предложено определять по изменению микробиологических и органолептических показателей, перекисного числа.

5. Впервые составлен алгоритм управления контролем качества на предприятии, позволяющий оптимизировать научно-методические подходы к мониторингу качества и безопасности косметическойпродукции в соответствии с международным стандартомсерии ИСО 9000.

Список литературы.

1. Алавердиева, С. Антиоксидантный баланс в косметических средствах / С. Алавердиева,А. Кривова // Косметика и медицина. – 1999. - № 1. - С. 11 -15.

2. Аристархова, С.А. Регуляторная роль взаимосвязи изменений в концентрации антиоксидантов в составе липидов клеточных мембран / С.А. Аристархова, Е.Б. Бурлакова, В.О. Гвахария // Докл. АН СССР. – 1976. - Т. 228, № 1. - С. 215 - 218.

3. Аронов, И.З., Версан В.Г. О моделях систем управления // Стандарты и качество. -2003.- № 2.- С. 56-58.

4. Аширь, В.А. Популярныелекции  окосметическихсредствах  иихвлиянии  наорганизмчеловека.  С.-Петербург,типография Р.Голике, 1866.-125 с.

5. Багирова, В.Л. Настойки, экстракты, эликсиры и их стандартизация/ В.Л Багирова, В.А. Северцев // С.-Петербург. - Спец Лит. -  2001. -223 с.

6. Баранникова, О. Государство не должно контролировать качество косметики // Новости косметики. – 2002. - № 9. – С. 66 – 67.

7. Барсуков, Л.И. Липосомы / Л.И. Барсуков // Биология. - 1998. - 150 с.

8. Бергельсон, Л.Д. Мембраны, молекулы, клетки. М.: Наука, 1987. – 80с

9. Брославский, Л.ИПравовое обеспечение качества продукции /Л.И. Брославский. М., 1987. – 31 с.

10. Верещагин, А.Г. Биохимия триглицеридов / А.Г. Верещагин. – М.: Наука, 1972. – 308 с.

11. Вилкова, С.А. Товароведение и экспертиза парфюмерно-косметических товаров. М.: Деловая литература. – 2000. – 47 с.

12. Владимиров, Ю.А. Мембранные липиды// Пат. физиол. – 1989. - № 4. - С. 7 - 18.

13. Владимиров, Ю.А. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах / Ю.А. Владимиров, А.И. Арчаков. - М.: Наука, 1972. – 252 с.

14. Влияние продуктов перекисного окисления липосомальных липидов на антибактериальную активность липосом /Л.П. Мельянцева, В.М. Крейнес, Т.И. Шраер и др. // Антибиотики и химиотерапия.-1999. -Т. 37, № 11.-С.8-10.

15. Воронков, В.Н. Исследование механических свойств кожи человека в норме ипри патологических состояниях: Автореф. дис. … канд. биол. наук / В.Н. Воронков. – Пущино: Б.и., 1993. - 21 с.

16. Гевренова, Р. Современните фитохимични и фармакологични познания за сенниковите растения, использовани в народната медицина / Р. Гевренова, И. Асенов // Фармация. - 1995. – Т. 4. - С. 31 - 37.

17. Гончарова, Т.П. Энциклопедиялекарственныхрастений: (лечениетравами): В 2-хтт.Т.1.-М.: Изд. Дом МСП. - 1998. – 560 с.

18. Горболенко, Е.А.Экономика и конкурентоспособность / Е.А. Горболенко, И.А Коровкин // Партнеры и конкуренты. -2000. -  № 9. – С. 15-17.

19. Горячев, А.В. Достоинства и недостатки Федерального закона «О техническом регулировании» // Стандарты и качество.– 2003.- № 7 – С.32-35.

20. Государственная фармакопея СССР. Общие методы анализа. Вып.1 / МЗ СССР. - 11-е изд., доп. - М.: Медицина, 1987. – 336 с.

21. Государственная фармакопея СССР. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье. Вып.2 / МЗ СССР. - 11-е изд., доп. - М.: Медицина, 1989. - 400 с.

22. Дудниченко, А.С., Краснопольский, Ю.М., Швец, В.И. Липосомальные лекарственные препараты в экспериментальной клинике. – Харьков. Изд. Группа «РА – Каравелла», 2001.-144 с.

23. Ефременко, В.И. Липосомы (получение, свойства, аспекты применения в биологии и медицине)  – Ставрополь: Б.и., 1999. - 263 с.

24. Ефременко, В.И.Липосомы (получение,свойства,  аспекты применения в биологии и медицине) / В.И. Ефременко. – Ставрополь: Б.и., 2001. - 236с.

25. Иванова, Н.Н., Петров, В.И., Каплун, А.П., и др. Физиологически активные липиды // Вестн. АМН СССР. – 1990. - № 6 .– С. 38-40.

26. SeseliGrandivitatum / М.А. Балабуткин, Э.М. Агаев, А.З. Абышев и др. // Хим. – фармац. журн. – 1993. - №3. – С. 47.

27. Использование в клинической медицине липосомальных форм лекарственных препаратов / В.Ф. Антонов, Ю.А. Князев, Ю. Машковский и др. // Сов. медицина. – 1983. - № 5. - С. 59-63.

28. ионофореза / Л.М. Кузякова, Э.Ф. Степанова, А.В. Умнов, и др. // «Человек и лекарство», российский нац. конгр. (9; 2002; Москва). Материалы / IX Рос. нац. конгр. «Человек и лекарство». – М., 2002. – С. 644-645.

29. Калантаевская, К.А. Морфология и физиология кожи человека. – К.: Здоровъя, 1972. –267с.

30. Корсун, В.Ф., Ситкевич, А.Е., Ефимов, В.В. Лечение кожных болезней препаратами растительного происхождения: Справочник. Минск: Беларусь. 1995.- 383с.

31. Крепс, Е.М. Липиды клеточных мембран. Ленинград: Наука, 1981. –339 с.

32. Крейтис, М. Техника липидологии / М. Крейтис. - М.: Мир, 1975. - С. 258-286.

33. Краснопольский, Ю.М., Степанов, А.Е., Швец, В.И. Некоторые аспектытехнологии получения липосомальных форм лекарственных препаратов./ Ю.М. Краснопольский, А.Е. Степанов, В.И. Швец. // Химико-фармацевтический журнал.- 1999. – С. 20-23.

34. Круглякова, К.Е. Общие представления о механизме действия антиоксидантов / К.Е.Круглякова, Л.Н.Шишкина // Исследование синтетических и природных антиоксидантов invitro и invivo: Сб. науч. ст. / Московское общество испытателей природы; Институт химической физики им. Н. Н. Семенова. – М., 1992. – С.27-32.

35. Кузякова, Л.М. Липосомы в медикаментозном преодолении клеточных и анатомических барьеров / Л.М. Кузякова// Фармация на современном этапе – проблемы и достижения: Сб. науч. трудов / НИИФ. – 2000. - Т. 39. - С. 70-77.

36. Кузякова, Л.М. Методологические подходы и разработка технологии липосомальных лекарственных и лечебно-профилактических препаратов: Дис. … д-ра фарм. наук / Л.М. Кузякова. – Пятигорск: Б.и., 2000. - 326 с.

37. Кучеренко, Н.Е. Липиды / Н.Е. Кучеренко, А.Н. Васильев. - Киев: Вища шк. Головное изд-во, 1985. – 247 с.

38. Лившиц, И.М. Стандартизация, метрология и сертификация: Учебник / Лившиц И.М. – М. : Юрайт., 2004. – 330 с.

39. Липосомы в биологических системах / Под ред. Г. Грегориадиса, А. Аллисона, - М.: Медицина, 1983. – 384 с.

40.   Липосомы и перспективы их использования в прикладной иммунологии/ Г.С. Власов, В.Ф. Салов, В.П. Торчилин и др. //ЖМЭИ.–1982.- N 8.- С.12 - 19.

41. Локализация α-токоферола в гидрофобной зоне липидного бислоя / В.Е. Каган, В.И. Скрыпин, Е.А. Сербинова и др. // Докл.АН СССР. – 1986. - Т. 288, № 5. - С. 1242-1245.

42. Лопатин, П.В. Коростин, Б.И. Ультраэмульсия как лекарственная форма управляемой доставки лекарственных веществ. Биологическиактивные эмульсии в эксперименте и клинике. / П.В. Лопатин, Б.И.Коростин // Сб. науч. Трудов. М. - 1983. -С. 179 - 185.

43. Марголина, А.А., Эрнандес Е.И.,  Зайкина, О.Э. Новая косметология. – Издат. дом  «Косметика и медицина». – М. - 2000. – 204 с.

44. Марголина, А.А. Липидный барьер кожи и косметических средств / А.А. Марголина, Е.И. Эрнандес, О.Э. Зайкина // Косметика и медицина. – М. - 2002. – 9 с.

45. Марголина, А.А., Эрнандес, Е.И. Возможности косметологии в лечении акне // Косметика и медицина. – 2003. №1. – С. 38-45.

46. Марголис, Л.Б. Липосомы и их взаимодействие с клетками / Л.Б. Марголис, Л.Д. Бергельсон. - М.: Наука, 1986. – 240 с.

47. Маркин, В.С. О первичном акте в процессе слияния мембран / В.С. Маркин, М.М. Козлов// Биофизика. - 1983. -T. XXVIII, вып.1. - С. 72-77.

48. Методические рекомендации по иммобилизации в липосомы веществ различной природы, стерилизации и стабилизации липосом: Утв. МЗ РФ 06.04.2000г. / В.И. Ефременко, Т.В. Таран, Л.М. Кузякова и др. – Ставрополь: Б.и., 2000. - 46 с.

49. Мичник, О.В. Исследование реологических свойств мазей, содержащих различные фитокомплексы / О.В. Мичник, Э.Ф. Степанова, В.В. Гладышев// Фармация.  – 1993. - Т. 1. – С. 21-24.

50. Молчанов, Г.И. Интенсивная обработка лекарственного сырья / Г.И. Молчанов. - М.: Медицина, 1981. – 205 с.

51. Николаев, А.Я. Биологическая химия /А.Я. Николаев. - М.: Медицинское информационное агентство, 2001.- 496 с.

52. Новый подход к клинической оценке парфюмерно-косметической продукции / А.А. Кубанова, В.Н. Федорова, И.И. Богатырева и др. // «Биологически-активные вещества и новые продукты в косметике», междунар. конф. (1996; Москва). Тез. докл. междунар. конф. – М., 1996. – С. 62.

53. Орлова, Г.Л.  Микробиология.- М.: Медицина, 1979. – 315 с.

54. Парций Я.Е. Комментарий к правилам торговли. М. : Юрайт., -2003. – 37 с.

55. Пат. 2053763 РФ, МПК 6 А61К7/48. Биологически-активная добавка для косметических изделий / Некрасова В.Б., Курыгина В.Г., Никитина Т.В. и др. (РФ). – 7 с.

56. Петрухин, А.Т. «Флавоноидосодержащие растения, используемые в косметике» // Косметика и медицина, 2003. №3.- С. 46-54.

57. Пугачев, С.В. Стандартизация : проблемы и перспективы развития // Стандарты и качество. – 2003. - № 3. – С. 12 – 17.

58. Рахманов, М.Л. О создании национальной системы аккредитации в Российской Федерации// Сертификация. – 2003. - № 2. – С. 6-7.

59. Рубцов А.В. и др. Как делают проекты специальных технических регламентов. М. : Регламент. – 2003. – 37с.

60. Руководство по методам исследования, технологическому контролю и учету производства в масложировой промышленности:В6т./ Под ред. В.П. Ржехина, А.С. Сергеева. – Л.:ВНИИЖ, 1967. – Т.1, кн. 1. – 585 с.

61. Слетов, Н.В.Врачебнаякосметика / Н.В. Слетов.-М. Наука, 1928. – 45 с.

62. Степанов, А.Е. Краснопольский Ю.М., Швец В.И. Физиологически активные липиды. - М.: - Наука. - 1991.- 136 с.

63. Тимко, В.Я., Панкина,Г.В. Проведение сертификации продукции посредством процедуры признания // Сертификация. – 2000. -№ 1. – С. 32-34.

64. Трейер, В.В. Национальная система стандартизации : какой она  должна быть // Стандарты и качество. – 2003. - №8. – С.38-47.

65. Удянская, И.Л. Антиоксидантная защита / И.Л.Удянская // Сырье и упаковка. - 2001. - № 1 (11). - С. 20 - 21.

66. Умнов, А.В. Экспериментальное определение оптимальной концентрации фитолипосом в составе противоожогового геля / А.В. Умнов. // «Человек и лекарство», российский нац. конгр. (9; 2002; Москва). Материалы / IX Рос. нац. конгр. «Человек и лекарство». – М., 2002. – С. 711.

67. Хертель, Б. Молекулярные и клеточные механизмы естественного старения и фото старения (стрессорные факторы, защитные механизмы) / Б. Хертель // Косметика и медицина. - 2000. - № 4. – С. 5 - 17.

68. Ципоркина, И.В. Практическая косметология для всех. Лучшие методики / И.В. Ципоркина. – СПб: Питер, 2002. – 224 с.

69. Швец, В.И., Степанов А.Е., Крылова В.Н.. Мио-инозит и фосфоинозиты.- М.- Наука.- 1987.- 240 с.

70. Швец,В.И.,  Краснопольский, Ю.М., Каплун, Ю.М., Степанов А.Е. Биотехнологические направления в создании лекарственных и диагностических препаратов липидной природы.// Вопросы мед. химии, 1997.- С. 416-424.

71. Чернух, А.М. Кожа. М.: Медицина, 1982. – С. 196-229.

72. Элькина, Б.И., Каплун, А.П., Швец, В.И. Липидные препараты//Хим.- фарм. журнал 1986. – 1988.- № 2. – С.72-77.

73. Aekermann, H.-W., Dibow, M.S. Viriuses of procariotes // V.1. General properties of bacteriofages. CRC Press Boca Raton Fl. 1987. – P.151-154

74. Allenby, A.C. / A.C. Allenby, N.H. Creasey, J.A.G.Edginton et al. // Brit. J. Derm. – 1969. - 81, Suppl. 4. - P. 47.

75. Arct, J. IFSCC /J. Arct, M. Gronwald, K. Kasiura //Magazine. - 2001. – Vol.14. - P. 179.

76. Arnold, J. A simple procedure for preparation of REV-liposomes /J.Arnold, A.I.Deev // Pharmazie. - 1985. - Vol. 40, № 11. - P. 808 – 809.

77. Ashady, R. (Ed.) Microspheres, Microcapsules & Liposomes. Citrus        colloidal carrier systems. Proceedings from 4th Books, London. -  1999. – Р.279.

78. Bangham, A.D. Negative Staining of Phospholipids and their Structured Modification by Surface Agents as Observed in the Electron Microscope / A.D. Bangham, R.W. Horne//J. Mol. Biol. - 1964. - Vol. 8. - P. 660-668.

79. Bangham, A.D. Diffusion of Univa-lent Ions Across the Lamelae of Swollen Phospholipids / A.D. Bangham, M.M. Standish, J.C. Watkins // Ibid. - 1965. - Vol.13. - P. 238-252.

80. Barsukov, L. I. Topological asymmetry of phospholipids in membranes /L.I. Barsukov, L.D. Bergelson //Science. – 1977. - Vol. 197. - P. 224 - 230.

81. Blank, I. H. / I.H. Blank // J. Invest. Derm.. – 1964. – Vol. 43. - P. 415.

82. Brewster M.E., Loftsson T. The use of chemically modified
cyclodextrins in the developments of formulations for chemical          delivery systems. Pharmazie. -2002 .-Р. 94.

83. Buettner, G. R. Ascorbate autoxidation in the presence of iron and copper chelates /G. R.Buettner // Free Radic Res Commun. - 1986. - №1(6). - P. 349 - 353.

84. Burch, G.E. / G. E.Burch, T., Winsor // Arch. Derm. Syph. – 1946. – 53. – Р. 1 - 39.

85. Cevc, G. Transferosomes, liposomes, and other lipid suspensios on the scin. Crit. Rev in: Therapeutical Drug Carrier Systems, 1996.- P.257-388.

86. Dijkstra, J. A procedure for the efficient incorporation of wild-type lipopolysaccharide into liposomes for use in immunological studies / J. Dijkstra, J.L. Ryan, F.C. Szoka // J. Immunol. Meth. - 1988. - Vol.114, №1-2. - P. 197-205.

87. Eytan, G.'D. Use of liposomes for reconstitution of biological functions / G.'D. Eytan // Biochim. et biophys. аcta. - 1982. - Vol. 694. -P. 185 - 202.

88. Filbry, A, Scherdin U, Scholermann, A., Hegens, R., Mei, W., Rippke, F. Signs of premature skin aging are reduced. / A Filbry, U Scherdin, A Scholermann., R., W. Hegens Mei, F. Rippke //Kosmetische Medizin. – 2002. -   №3. – P. 163-165.

89. Fountain, M.W. Interactions multilamellar phospholipid vesicles with bovine lymphocytes: effects of a – tocopherol on lymphocyte blastogenesis /M.W. Fountain, C. Dees, J.D. Weete // Mol. Immunol. – 1982. -Vol.19, №11. – P. 1491-1498.

90. Fountain,M.W.Glyceraldehyde-3-phosphat-dehydragenasepromote Ca²⁺dependent fusion of liposomes and secretion sinpermeabilyzed neutrophis / M.W. Fountain, S.J. Stoehr, D.I. Margolis // J. Cell.Biol. – 1990. - Vol. 111, № 5. - P. 77.

91. Gains, N. Characterisation of small unilamellar vesicles produced in imsonicated phosphatidic acid and phosphatidylcho-lin-phosphatidic acid dispersions by pH adjustment / N. Gains, H. Hauser // Biochim. Et biophys. аcta. - 1983. - Vol. 731. - Р. 31 -39.

92. Gregoriadis, G. Comparative effect and   fate of non-entrapped and liposome-entrapped neuraminidase injected into rats / G. Gregoriadis, D. Putnamn, L. Louis // Biochem.J. - 1974. - Vol. 140. - P. 323-330.

93. Crommelin, D., Schreier, H. Liposomes inColloidal  DrugDeliverySystems./ D. Crommelin, , H.Schreier // Kreuter J. (Ed.) Marcel Dekker, New York. -1994. Р.73 – 157.

94. Gibson J RRationale for  thedevelopment of newtopical  treatmentsfor acne vulgaris // Biochim. Et biophys. аcta. - 1996. - Vol. 57. - Р. 9-13.

95. Hayashi, K. Fractionationofalfa and gamma linolenikacid enriched triacylglicerols from vegetable oils by column chromatografthy on silic acid / Hayashi K.  //Yukagaku. – 1993. – Vol. 42 – Р. 942.

96. Hexsel, D.M. SURGICAL ROUNDS: subcision: a treatment for cellulite / D.M. Hexsel, R. Mazzuco Int J. Dermatol. - 2000. - 39(7). - P. 539-544.

97. Igarashi, O. Synergistic action of vitamin E and vitamin С in vivo using a new mutant of Wis-tar - strain rats, ODS, unable to synthesize vitamin С / O. Igarashi, Y. Yonekawa, Y. Fujiyama - Fujihara // J Nutr Sci Vitaminol (Tokyo). – 1991. - 37(4). - P. 359 - 369.

98. Jagawa, Y. Partial resolution of the enzymes catalyzing oxidative phosphorylation / Y. Jagawa, E. Racher // J. Biol. Chem. - 1971. - Vol.246. - P. 5477 - 5487.

99. Jizomoto, H. Encapsulation of drugs bylyiphilized, empty    dipalmitoylphosphatidylcholine    liposomes / H. Jizomoto, E. Kanaoka, K. Hirano // Chem. and Pharm. Bull. - 1989. - Vol. 37, № 7. - P. 1895-1898.

100.Kantor, H.L. Fusion of phosphatidylcholine bilayer vesicles. Role of free fatty acids / H.L. Kantor, J.H. Prestegard // Biochemistry. - 1978. - Vol. 17. - P.

101.Kas H.S. (Ed.). Int J Pharm, Proceedings from the 13th International   Symposium on Microencapsutation, 2002. -Р.420

102.Kas H.S.Chitosan: properties,prepararationsand  applicationtomicrocapsulatesustems. JMicroencapsulation . -1997. – Р. 689-711.

103.(Кудрин, А.Н.) Kudrin, A.V. Research of selenium containing substances that regulated the rhytm of the heart/ А.Н. (Кудрин) A.V. Kudrin // lakuzaigaku. - 1993. - Vol. 53, №9. - P. 14-19.

104.Lichtenberg, D. Structural characteristics of phospholipid multi-lamellar liposomes/ D. Lichtenberg, T. Markello // J.Pharm.Sci. - 1984. - Vol. 73, № 1. -P. 122-125.

105.Loftsson, Т., Brewster M.E. Pharmaceutical applications of cyclodextrins. 1. Drug solubilization and stabilization. J PharmSci. -1996. - Vol. 85. – Р.10-17.

106.Love, W.G. High performance liquid chromatographic analysis of liposomestability / W.G. Love, N. Amos,B.D. Williams // J. Microencapsul. - 1990. - Vol. 7, № 1. - P. 105-112.

107.Magee, W.E. / W.E. Magee, C.W. Goff, J. Schoknecht et al // J. Cell Biol. - 1974. - Vol. 63. - P. 492 - 504.

108.Mantle, D., Gok M.A., Lennard T.W. Adverse and beneficial effects of plant extracts on skin and skin disorders // Eur. JournalDerrmatology, 2002.-№6.- Р.- 57-60.

109.Margalit R. Liposome-mediated drug targeting in topical and regional therapies. Crit Rev Therapeutic Drug Carrier Systems. -1995. – Р. 233.

110.Mauriege, P. Regional and gender variations in adipose tissue lipolysis in response to weight loss. / P. Mauriege, P. Imbeault, D. Langin // J Lipid Res. – 1999. - 40(9). - P. 1559-1571.

111.Medda, S. Glycoside-bearing liposomal delivery systems  againts  macrophage-associateddisorders involving MycobacteriumlepraeandMycobacterium  tuberculosis / S. Medda, N. Das, S.B. Mahato // Indian J. Biochem. and Biophys. - 1995. - Vol. 32, № 3. - P. 147-151.

112.Muller, R., Mader, K., Gohla,S. Solid lipid nanopa rtides (SLN)forcontrolled drug delivery — a review of the state of the art. Eur J PharmBiopharm2000. – Р. 161-177.

113.Mowri, H.O.Effect of lipid composition of liposomes on their sensitivity to peroxidation/ H.O. Mowri, S. Nojima, K. Inoue // J. Biochem. - 1984. -Vol. 95, №2. - P. 551-558.

114.Nakagawa, X. Transfer of steroids and a tocopheol between liposomal membranes / X. Nakagawa, S. Nojima, K. Inoue // J. Biochem. - 1980. - Vol. 87, №2. - P. 497-502.

115.Petkau, A. / A. Petkau, A.K. Chelak// Biochim. biophys. аcta. – 1967. – Vol. 135, № 5. – P. 812 – 824.

116.Pflucker F., Mane S., Marchio F, Witte G., zur Lage J., Mommaas A., Koerten H., Driller H J. Encapsulation of hydrophobic cosmetic ingredients using stable and flexible capsules. Proceedings from the21st IFSCC congress, Berlin 2000.- Р. 507-513.

117.Pick, U.Liposomes with a large trapping capability prepared by freezing / U.Pick // Arch. Biochem. and Biophys.- 1981. - Vol. 212. -P. 186-194.

118.Poste, G. In: Methods in Cell Biology / G. Poste, D. Papahadjopoulos // Ed. D. M. Prescott. Academic Press, New York. - 1976. - Vol. 14. - P. 23 - 32.

119.Poste, G. In: Membrane Fusion / G. Poste, C.A. Pasternak // Eds. G. Poste, G.L. Nicolson. Cell Surface Reviews. North - Holland, Amsterdam.– 978. - Vol. 5. - P. 305-365.

120.Preparation of liposome of defined size distribution by extrusions through polycarbonate membranes / F. Olson, C.A. Hunt, F.C. Szoka et al. // Biochim. et biophys. аcta. - 1979. - Vol. 557. - P. 9 - 23.

121.Rolssler,B., Kreuter, J., Scherer, D. Collagen miooparticles: prepararations  andproperties. J. Microencapsulation. – 1995. – Р. 49-57.

122.Schafer, U., Blume, G., Tekhmuller, D. The role of liposomes andtheirfuture  perspectives./ Sacher, M.// SOFW-Journal.-   2003.- № 8.- Р. 10-14.

123.Schreier, H., Boustra, J. Liposomes and niosomes as topical drag carriers. J. Control Rel. – 1999. –P.1-15.

124.Senda,ML, Takeda J., Abe S., Nakamura T. Plant and Cell Physiol. – 1979. - Vol. 20. - P. 1441.

125.Shaw, J.C. Acne – effect of hormones on pathogenesis and management // Clinical Dermatology, 2002. №2.- Р.23 – 30.

126.Spruit D. Dermatologica. - 1966. – 132. – Р. 2 - 131.

127.Spruit D., Malten K.E. Dermatologica (Basel). – 1969. – 5. – Р. 418.

128.Storm G., Crommelin D. Liposomes: Quo vadis? PSTT . – 1998. -Р.31

129.Sweeney, T.M., Downing, D.T. // J. Invest. Derm. – 1997. – 55. – Р. 2-135.

130.Tholon L., Branka J.-E., Wajsman J., Perrier E. Encapsulation  technologiesapplied toretinoids, a way to modulatebioavailabilityand  reactivity. Proceedingsfromthe  21stIFSCCcongress, Berlin2000.- P. 497 - 506.

131.Tregear R.T. J. Invest. Derm. – 1966. – 46. – Р.1-16.

132.New aspects of liposomes / D.A. Tyrrell, Т.D. Heath, C.M. Colley et al. // Biochim. et Biophys. аcta. – 1976. - Vol.457, № ¾. - P. 259 - 302.

133.Tyrrell D.A., Richardson V.J., Ryman B.E. // Biochim. Biophys. аcta. - 1977. - 497. - Р. 469-480.