КОЛИЧЕСТВЕННОЕ СОДЕРЖАНИЕ ФЛАВОНОИДОВ И САПОНИНОВ В ЛЕКАРСТВЕННОМ РАСТИТЕЛЬНОМ СЫРЬЕ СТЕВИИ (STEVIA REBAUDIANA BERTONI)
КОЛИЧЕСТВЕННОЕ СОДЕРЖАНИЕ ФЛАВОНОИДОВ И САПОНИНОВ В ЛЕКАРСТВЕННОМ РАСТИТЕЛЬНОМ СЫРЬЕ СТЕВИИ (STEVIA REBAUDIANA BERTONI)
Велиева Г.А., Щепетова Е.В., Хлебцова Е.Б.
Стевия Ребауди (stevia rebaudiana bertoni) – многолетнее травянистое растение семейства астровых, распространенное в странах Южной Америки и Азии, известное большим содержанием в листьях сладких гликозидов (основным из которых является стевиозид) [1]. Растительное сырье – листья стевии Ребауди используют в составе комплексных фитопрепаратов и диетической добавки – заменителя сахара в США, Канаде и Японии и др. странах. Известно [2], что листья стевии Ребауди содержат флавоноиды (рутин, кверцитин и др.), терпены, сапонины, аминокислоты, минеральные вещества (калий, кальций, фосфор, магний, кремний, цинк, медь, селен, хром), витамины С, А, Е и витамины группы В. Согласно литературным данным, отвары и настои листьев стевии улучшают работу сердечно-сосудистой и иммунной систем, нормализуют давление и обладают антиоксидантным, адаптогенным, противовоспалительным, антиаллергенным, антимикробным, противовитрусным и противогрибковым действием.
Цель настоящего исследования: количественное определение суммы флавоноидов и качественное определение тритерпеновых сапонинов в растительном сырье стевии Ребауди (stevia rebaudiana bertoni).
Экспериментальная часть. Объектом исследования являлось сухое сырье – листья стевии Ребауди.
Для количественного определения суммы флавоноидов в сырье стевии Ребауди нами использовалась методика, основанная на их способности образовывать окрашенный комплекс со спиртовым раствором хлорида алюминия [1,2] в двух случаях. Время прохождения комплексообразующей реакции согласно используемой нами методике составляет 40 минут.
В одном случае для выделения флавоноидов проводили экстракцию растительного материала 60% этиловым спиртом. Максимальное извлечение флавоноидов из сырья происходило при нагревании на водяной бане с обратным холодильником в течение 60минут. Оптическую плотность раствора измеряли на спектрофотометре ПЭ-5400 в кюветах с толщиной слоя 10мм. В качестве раствора сравнения использовали водно-спиртовый раствор препарата без хлорида алюминия. Значение оптической плотности составляет 0,952 при длине волны 410 нм.
Процентное содержание суммы флавоноидов в пересчете на лютеолин-7-гликозид представлено в таблице 1:
Таблица 1
Содержание суммы флавоноидов в водно-спиртовой настойке травы стевии РебаудиИсследуемые пробы Содержание суммы флавоноидов, % на 100г сырья
водное извлечение из растительного сырья – листьев стевии Ребауди12%
Установлено, что общее содержание флавоноидов в листьях стевии Ребауди составляет 12% в пересчёте на лютеолин-7-гликозид.
В другом случае, к 1 мл аликвоты анализируемого водно-спиртового экстракта листьев стевии Ребауди добавили 5%-ный раствор хлорида алюминия, в качестве раствора сравнения использовали тот же экстракт, но без добавления раствора хлорида алюминия. Оптическую плотность определяли в интервале 408-616нм на длине волны максимума поглощения в кюветах с толщиной поглощающего слоя 1см. Результаты отражены на рисунке 1.1:
Рисунок 1.1. Электронные спектры поглощения водно-спиртового раствора растительного сырья - листьев стевии РебаудиМаксимум поглощения расположен в области 408-415нм, поэтому в качестве стандарта в дальнейшем мы использовали ГСО рутина.
Для построения калибровочного графика зависимости оптической плотности от количества рутина готовили водно-спиртовый раствор этого вещества. Измеряли оптическую плотность при длине волны 415 нм в кювете с толщиной поглощающего слоя 1 см; в рабочую кювету помещают раствор рутина с хлоридом алюминия, в кювету сравнения – нулевую пробу.
Калибровочный график зависимости оптической плотности от количества рутина в спектрофотометрируемом растворе отражено на рисунке 1.2:
Рисунок 1.2. Электронные спектры поглощения стандартных растворов рутина
Определение суммы Р-активных флавоноидов в исследуемом экстракте в пересчете на рутин отражено в таблице 2:
Таблица 2
Содержание суммы флавоноидов в водно-спиртовой настойке
листьев стевии РебаудиИсследуемые пробы Содержание суммы флавоноидов, % на 100г сырья
водное извлечение из растительного сырья – листьев стевии Ребауди17%
Качественные реакции определения сапонинов в водных извлечениях
СТЕВИИ (STEVIA REBAUDIANA BERTONI)
Качественные реакции Наблюдаемые явления
С 0,1 моль HClСтойкая пена
Стойкая пена
С 0,1 моль NaOHС раствором среднего ацетата свинца небольшой осадок желто-зелённого цветаРеакция ЛафонаСине-зелёное окрашивание
Известно, что тритерпеновые сапонины образуют стойкую пену с кислотой и со щелочью, а также осаждаются средним ацетатом свинца. На основании полученных результатов можем утверждать, что в наземной части исследуемых растений содержатся тритерпеновые сапонины.
Количественное содержание тритерпеновых сапонинов в листьях Стевии определяли в пересчете на олеаноловую кислоту методом прямой спектрофотометрии.
Количественное определение сапонинов
Спиртовое извлечение травы STEVIA REBAUDIANA BERTONI готовили пятикратным экстрагированием 96% этиловым спиртом воздушно-сухого сырья. Полученные извлечения фильтровали и объединяли в мерную колбу на 250 мл, недостающий объем восполняли экстрагентом.После выпаривания аликвоты досуха, последующего растворения (ледяная уксусная кислота - хлористоводородная кислота – вода 3,5:1:5,5) гидролиза и растворения образующегося осадка в спирте, добавления концентрированной серной кислоты, измеряли оптическую плотность раствора, в качестве раствора сравнения использовали концентрированную серную кислоту. Сравнивали полученную оптическую плотность с таковыми данными стандартного раствора олеаноловой кислоты в аналогичных условиях проведения эксперимента. Полученные результаты отображены на рисунке 1:
Рисунок 1. Электронные спектры поглощения спиртового раствора растительного сырья - листьев STEVIA REBAUDIANA BERTONI.
Процентное содержание суммы тритерпеновых сапонинов в пересчете на олеаноловую кислоту в листьях составило 15%
Список литературы
1. Ладыгина Е.Я., Сафронич Л.Н., Отряшенкова В.Э. и др. под ред. Гринкевич Н.И. Сафронич Л.Н. Химический анализ лекарственных растений. Учеб. пособие для фармацевтических вузов. – М.: Высшая школа, 1983. 176 с.
Лобанова А.А., Будаева В.В., Сакович Г.В. Исследование биологически активных флавоноидов в экстрактах из растительного сырья //Химия растительного сырья, 2004.-№1. -С.47-52.
3. Семенова Н.А. Стевия – растение 21века. -СПб.: Диля. 2005. 160с.
4. Семенова Е.Ф., Веденеева А.С., Фролова Т.И. Об антимикробном эффекте стевии Ребо (Stevia rebaudiana Bertoni) //Актуальные проблемы медицинской науки и образования: труды 2 межрегиональной научной конференции. -Пенза: Информационно-издательский центр ПензГУ,2009. С227-228.
5. Ситничук И.Ю., Стриженова Е.Н., Ефремова А.А., Первышина Г.Г. Разработка эффективного способа выделения суммы дитерпеновых гликозидов из Stevia rebaudiana bertoni //Химия растительного сырья. 2002. №3. С.73-75.
6. Костина В.В., Абелян В.А. Исследование использования ферментативно модифицированного стевиозида в производстве молочных напитков //Вестник СевКавГТУ. 2003. №1(6). С.6.
7. Nord,С., Heimdahl A., Kager L. Ecological effect of antimicrobial agent on human intestinal microflora //Microbial Ecol.Health.Dis.1991. №2. P.193-207.