МИНИСТЕРСТВОЗДРАВООХРАНЕНИЯУКРАИНЫ
Харьковскийинститутусовершенствованияврачей
ОДОБРЕНО
Ученым Советом ХИУВ протокол № 6 от 21.06.96 г.
ДИАГНОСТИКА И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ТЕРАПИЯ ИНВАЗИИ РОТОВЫХ ПРОСТЕЙШИХ У БОЛЬНЫХ ПАРОДОНТИТОМ
/ Методическиерекомендации /
Харьков – 1996
ББК 56.6 Д44
Вметодическихрекомендацияхпредставленысведенияоап-робированыхметодахлабораторнойдиагностикиинвазииротовых простейшихубольныхпародонтитом, подробноизложенасравни -тельнаяоценкаэтихметодов. Данырекомендацииометодахспецифическойпротистоциднойтерапиипризаболеванияхпародонта.
Методическиерекомендациипредназначеныдляврачей-стоматологов, врачей-интернов, слушателейфакультетовусовершенствованияврачей, паразитологов, лаборантов. Могутбытьполезныинфекционистам, оториноларингологам, микробиологам.
Методическиерекомендациисоставили: профессорВ.Ф.Куцевляк; профессор В.А.Никитин; профессорЮ.Л.Волянский; профессорС.В.Бирюкова; к.м.н. Н.Ф.Дзюбан; ассистентЮ.В.Лахтин.
Кафедрытерапевтическойстоматологии, клиническоймикробиологииииммунологииХарьковскогоинститутаусовершенствования врачей.
Рецензент: профессорГ.Ф.Катурова
15ВМ 966-566-013-6
Вполостирта, вчастностипародонталышхкарманах, у больныхпародонтитомвстречаетсядвавидапротистов: Entamoebagangivalis- десневаяамебаиTrichomonastenax - ротовая трихомонада. Ониобитаютивкариозныхполостяхзубов, криптахминдалин. Многочисленныеисследования, посвященныеэтой проблеме, непозволяютокончательнорешитьвопросоролиих впатологическомпроцессе.
Присутствиеротовыхпротистовулицсинтактнымпаро -донтомдаютоснованиеавторамотнестиихнекпаразитам, а ккомменсалам. Однакоклиническиеилабораторныенаблюдения показывают, чтоприразныхпатологическихсостоянияхизменяетсяморфологическаяструктурадесневыхамеб, априинвазииротовымитрихомонадамитечениезаболеванияболеедлительное, затяжное. Особеннотяжелопротекаетпародонтит, при этомнаблюдаетсяобильноегнойноеотделяемоеизпародонтальныхкарманов. Крометого, вданныхслучаяхпародонтитплохо поддаетсялечениюобычнымилекарственнымисредствами, аназначениеспецифическойпротистоциднойтерапиибыстроприводит ккупированиювоспалительногопроцесса.
Впародонтологическойпрактикекназначениюпротистоцидныхсредствприбегаютдовольночасто, нередковслепую, безлабораторногоподтвержденияинвазиипростейшими. Поэтому своевременнаялабораторнаядиагностикапротоинвазииротовой полостииобоснованноепроведениепротистоциднойтерапииу больныхпародонтитомприобретаютактуальноезначение.
Кметодампротозоологическойдиагностикиинвазииротовыхпротистовотносятсяследующие: протозооскопиянативного препарата, протозооскопияокрашенногомазкаикультуральное.
исследование.
1. ПРОТОЗООСКОПИЯНАТИВНОГОПРЕПАРАТА
Принципметода: взятыйэкссудатизпародон-тальногокарманасмываютвкаплефизиологическогораствора напредметномстеклеипросматриваютподмикроскопом.
Реактивыиоборудование:
- стерильнаякорневаяигластурундой;
- предметноеипокровноестекла;
- физиологическийрастворилирастворРингера-Локка;
- микроскоп.
Заборматериалапроизводятизпародонтальныхкарманов. Стерильнуюкорневуюиглустурундойвводятвпародонтальный карманиповорачиваютвокругсвоейоси, затемпереносятв каплюфизиологическогораствора, помещеннуюнапредметном стекле, смываютвнейсодержимоесиглы, покрываютпокровным стекломимикроскопируютприоб. 40, ок. 7.
Физиологическийраствордолженбытьтеплым, поскольку двигательнаяактивностьтрихомонадвхолодномраствореснижаетсяилипрекращаетсявообще, чтоможетпривестикотрицательномурезультату. Дляэтогоприменяютспециальныенагревательныестолики. Мывэтихцеляхиспользуемвкачестве источникасветанебольшуюбытовуюлампу, длячеговынимаем зеркало-отражательвмикроскопеивставляемлампуподконденсор. Инфракрасноеизлучениелампынагреваетпредметное стеклосфизиологическимраствором.
Entamoebagangivalisвнативномпрепаратевыявляютсяв 100% случаях. Ониокруглойформы, оченьмедленнопередвигаются засчетвыпячиванияпсевдоподий. Псевдоподиипоявляютсяс одногополюсалибосразуснесколькихвразномнаправлении. Онипрозрачные, выступаютввидеязыковсзакругленнымконцом. Появлениепсевдоподииявляетсяглавнымотличительным признакомамеботлейкоцитов, которыепривоспалительном процессевпародонтепоройзанимаютвсеполезрения. При невнимательном, бегломпросмотреполязрениязаамебыможно принятьразрушенныелейкоциты, которыетеряютчеткуюкруглуюформуиядровыходитзапределыоболочки. Еслипсевдоподиипрозрачные, тоцентрамебмутный, можноувидетьфагоцитированныеядралейкоцитов. Размерыихвариабельны-: с лейкоцитидажеменьше, крупнеелейкоцита, иногдадостигаютгигантскихразмеров.
Trichomonastenaxвнативномпрепаратенамивыявляютсяв 35,4% извсехположительныхнаходок. Ониимеютнескольковытянутуюформу, похожинаплодгруши. Отличительнойчертойихот другихклеточныхэлементовсодержимогопародонтальныхкармановявляетсявыраженнаядвигательнаяактивность. Движение трихомонадэнергичное, "порхающее", сопровождаетсявыбрасываниемжгутиковнаодномизполюсов. Вовремядвижениятелопростейшихсокращаетсяионитовытягиваютсяпооси, то округляются. Двигательнаяактивностьихнастолькоэнергична, чтоонимогутбыстропокидатьполезрения. Втехслучаях, когданативныйпрепаратприготавливаютвбольшомколичестве физиологическогораствора, капляполучаетсятолстойитри-хомонадыбыстро "уходят" вглубинукапли, чтоможетпривестикотрицательнымрезультатам. Количествоособейвпрепаратенезначительное, от 1 до 2-3, поэтомунативныйпрепарат следуетпросматриватьтщательно.
Привыраженномвоспалительномпроцессевпародонтес плазмавсегдабазофильноокрашена, цветколеблетсяот нежно-голубогодонасыщенно-синего. Онаразделенанаинтенсивноокрашеннуюсвакуолямиивключениямиэндоплазму иболеепросветленнуюгомогеннуюэктоплазмуввидеузкой полоскипопериферии, гденикакихвключенийивакуолейне обнаруживается. Засчетэектоплазмыобразуютсявыростыили псевдоподии. Вэндоплазмеестьвакуоли, фагоцитированные лейкоцитыибактерии, оченьредкоэритроциты. Размерыамеб разные. Около 40% экземпляровкрупные, превышаютлейкоциты.
Вмазке, окрашенномметиленовымсиним, четкопросматриваетсяоболочкаамеб, ядротемно-синегоцвета, цитоплазмасветло-синяя, вакуолибесцветные.
Характерэкссудатавлияетнаколичествоамеб. Пригнойномэкссудатеихчисловозрастаетболеечемв 2 разапо сравнениюссерозным,
Результаты, полученныенами, показали, что 63,9% особейфагоцитируютлейкоциты. Всреднемнаоднуамебуприсерозномэкссудатеприходитсяпо 1,8 фагоцитированномулейкоциту, пригнойномэкссудатеинтенсивностьпоглощениялейкоцитоввозрастаетдо 2,42. Ядрафагоцитированныхлейкоцитов окрашиваютсявинтенсивныйфиолетовыйцвет. Эритрофагияи бактериофагиявстречаютсязначительнореже.
У 72,58% особеймыобнаруживалипсевдоподии. Сувеличениемразмеровамебувеличиваетсячастотаобнаружения псевдоподий. Аналогичнаяситуациянаблюдаласьисвакуолямивцитоплазме. Характерэкссудатасущественновлияетна качественныеизменениявструктурепростейших: пригнойном экссудатепсевдоподииболеевыражены, иногдаихмного, вакуоликрупнее.
Выявляемостьамебвмазкеиотпечаткеодинаковаи составляет 98,13%. Вотпечаткепротистыскапливаютсясразу понесколькоэкземпляроввполезрения. Таккакотпечаток занимаетнебольшуюплощадьнапредметномстекле, тоэтот способприготовленияпрепаратаимеетпреимуществаперед мазком, особенновтехслучаях, когдаколичествопростейших невелико. Однакофонпрепарата, состоящийизбольшогоскоплениялейкоцитов, эпителиальныхклетокиобильноймикрофлоры, непозволяетдетальноизучатьихморфологию. Этотнедостатокотсутствуетвмазке, ноприэтомприходитсяпросматриватьбольшуюплощадьмазка.
Trichomonastenaxвокрашенномпрепаратеимеютсвоюспецифическуюструктуру. В 62,82% ониокруглойформы, несколькореже грушевидной, веретенообразнойиливвидеусеченнойпирамиды. Наодномизполюсовимеетсяядро, расположенноеэксцентрично. Ядроимеетвидкосточкисливы, удлиненноеу 56,4% экземпляров, округлоеу 37-42% простейших. Оченьредкооно точечное, каплевидное.
ПоРомановскому-Гимзаядроокрашиваетсяоксифильно, бледно. Цитоплазмаокрашенабазофильно, слабо, имеетсетчатуюструктуру, иногдагомогенная. Уединичныхособейв цитоплазмевстречаютсяфагоцитированныебактерии. Поглощениялейкоцитовтрихомонадамимыненаблюдали.
НесмотрянавысказываниянекоторыхавторовобокрашиваниижгутиковиаксостилякраскойРомановского, мыне встретилиниодногоэкземпляратрихомонад, укоторыхэти органыпрокрашивались.
Приокраскеметиленовымсинимядротрихомонадинтенсивноокрашеновсинийцвет, протоплазманежная, сетчатая, светло-синяя, вакуолибесцветные.
Какидесневыеамебытрихомонадыимеютвариабельные размеры. Около 40% экземпляровприближаютсякразмерам лейкоцитоввпрепарате, остальныелибозначительноменьшелейкоцитов, либонесколькопревышаютих.
Извсехвыявленныхслучаевтрихомонаднойинвазиив отпечаткепротистовобнаруживалив 50,77%, вмазке - 89,23%, Таккакколичествопростейшихэтоговидавпрепаратесоставляетот 1-3 до 15-20, топриихнебольшомчислеобильный фонвотпечаткенепозволяетчеткодифференцироватьпротистов. Вмазкежевсеклеточныеэлементыразрознены, обособленыдруготдруга, полезренияхорошопросматривается, поэтомудажеединичныеэкземплярылегкоидентифицируются. Но дляэтогонеобходимопросматриватьвесьпрепарат, ихпоиск представляетопределенныетрудности.
3. КУЛЬТУРАЛЬНОЕИССЛЕДОВАНИЕ
Принципметода:содержимоепародонтальных кармановзасеваютвпитательнуюсредуипослеинкубациимикроскопируютраздавленнуюкаплю.
Реактивыиоборудование:
- стерильнаякорневаяигластурундой;
- предметноеипокровноестекла;
- пробирки;
- капиллярилипипетка;
- питательнаясреда;
- термостат;
- микроскоп.
Заборсодержимогопародонтальныхкармановпроизводят аналогичнопредыдущимметодам, однаконаиболееприемлемым являетсязаборстерильнымстоматологическимэкскаватором
№ 2 из
глубины кармана. Содержимое смывают в жидкую питательную
среду, которую затем
инкубируют в термостате при Т - 37° С.
Культура развивается в течение 3-6 суток. По окончании срока инкубации со дна
пробирки капилляром или пипеткой берут
осадок, каплю помещают на предметное стекло, покрывают покровным и микроскопируют с об. 40, ок. 7.
Применяется много питательных сред, но основными ингридиентами их являются физиологический раствор, сыворотка и углеводы.
Рекомендуют использовать простую сывороточную среду. Она проста в приготовлении и дает хороший рост трихомонад. Для ее приготовления берут 9 частей стерильного физиологического раствора, добавляют 1 часть лошадиной или бычьей сыворотки и 1 петлю стерильного рисового крахмала. Среду разливают в стерильные пробирки по 5-10 мл.
Наш опыт по культуралъной диагностике ротовых простейших показал, что простая сывороточная среда не всегда дает положительные результаты. Очевидно, это связано с региональными физико-химическими характеристиками воды, из которой готовят физиологический раствор. Физиологический раствор, приготовленный аптекой, у нас всегда имелрН 5,1 и питательная среда на таком растворе без добавления буферных солей роста трихомонад не давала.
Поэтому мы рекомендуем применять
среду Павловой. Способ приготовления: хлористый
натрий -
В качестве сыворотки применяют нормальную лошадиную сыворотку для приготовления питательных сред или сыворотку лошадиную сухую. Предварительно флакон с нормальной лошадиной сывороткой раскупоривают и оставляет в термостате на 3-е суток для испарения консерванта, а сухую растворяют в дистиллированной воде.
Культуральным методом на среде Павловой десневые амебы выявлены в незначительном числе /3,74% из
всех положительных результатов, полученных
другими протозоологическими методами/, поэтому для выделения их лучше
использовать среду следующего еоетава:
физиологический раствор - 1000,0 мл, мясо-пептонный
бульон - 20,0 мл,печеночный экстракт -20,0 мл, глюкоза -
Амебы развиваются в щелочной среде, а трихомонады предпочитают кислую.
Рост трихомонад на жидкой питательной среде Павловой выявлен в 76,92% среди всех положительных случаев. Определение в культуре этих простейших не представляет особого труда, посколько в поле зрения скапливается от 5 до 30-50 особей. Незначительная часть ротовых трихомонад имеет тот же вид, что и в нативном препарате. Подавляющее же число особей округляется, приобретает шарообразную форму. В цитоплазме видны заглоченные зерна крахмала. Выбрасывание жгутиков активное,у некоторых крупных трихомонад можно увидеть движе ниеундулирующеймембраныввидеволны, пробегающейподлинникутела.
4. ЛЮМИНЕСЦЕНТНАЯПРОТОЗООСКОПИЯ
Учитывая, чтовнекоторыхслучаяхпротозооскопияокрашенныхпрепаратовнепозволяетчеткоотдифференциоватьмелкиеособидесневыхамеббезфагоцитированыхлейкоцитов, вакуолей, псевдоподийотротовыхтрихомонад, предложеноиспользоватьлюминесцентнуюпротозооскопию.
Принципметода:приготовлениймазокилиотпечатокобрабатываютфлюоресцирующимвеществом, послечего объект, невидимыйвультрафиолетовомсвете, приобретаетиной цвет.
Оборудованиеиреактивы:
- корневаяигластурундой;
- предметноестекло;
-фиксатор /10% растворформалина/;
- флюоорохром /акридиноранжевый 1:10 000/;
- люминесцентныймикроскоп.
Содержимоепародонтальныхкармановпереносятнапредметноестекловвидеотпечаткаилимазка, высушивают, фиксируют в10% раствореформалинавтечение 10 минут, вновьвысушиваютиокрашиваютрастворомакридинаоранжевоговтечение 1 минуты. Микроскопиюпроизводятсиммерсионнымобъективом 90.
ВпервыеморфологическаяхарактеристикаротовыхпростейшихприпомощилюминесцентноймикроскопииданаП.С.Флис/1976/.
Десневыеамебы, окрашенныефлюорохромом, хорошоопределяются. Дляниххарактернотемно-зеленоесвечениецитоплаз мыиболеесветлоокрашенноеядро.
Ротовыетрихомонадытожеимеютспецифическоесвечение. Цитоплазмаокрашиваетсявкирпично-красныйцвет, ядролюминесцируетдостаточнояркобелесовато-оранжевымцветом. Четковиденаксостиль, жгутикичащенеопределяются.
Лейкоциты, создающиефонпрепарата, имеютзеленоватый оттенок.
Невсегдаротовыепростейшиеобнаруживаютсясразувсемиметодами. Каждыйизвышеназванныхметодовимеетсвоипреимуществаинедостатки.
Протозооскопиянативногопрепаратавдолжноймереявляетсяобъективнымметодом, однакоегоприменениедолжнобыть непосредственнопослевзятияматериалаилюбоепромедлениево времениприводиткснижениюдвигательнойактивноститрихомонад, чтовдальнейшемприведеткзатруднениювдифференциациис другимиклеточнымиэлементами.
Окрашенныйпрепаратпригодендлявыявлениядесневыхамеб, нообильныйфонвпрепаратенепозволяетобнаружитьединичные экземплярытрихомонад. Впрепарате, приготовленномввиде мазка, легченаходитькакдесневыеамебы, такитрихомонады, ноприэтомвозникаетнеобходимостьпросмотрабольшойплощадимазка.
КультуральнымметодомнасредеПавловойцелесообразно выявлятьтолькоTrichomonastenax. Недостаткомметодаявляетсяменьшаячастотавыявляемостипростейшихпосравнениюсмазком. Этосвязановбольшейчастистехническимипогрешностями: маломатериаладляисследования, помещениематериалавнеподогретуюсреду, несоблюдениережимаинкубации, рНсредыит.д.
Указанныенедостаткикомпенсируютсятем, чтодиагностику протоинвазииосуществляютпараллельновсемиметодами.
Техникадиагностическихпротозоологическихисследований проста, оборудованиеиреактивыдоступныдлялабораторийи стоматологическихучрежденийлюбогоуровня. Несмотрянаэто выявлениеротовыхпростейшихтребуетнатренированности, терпенияивниманиялаборантов.
СПЕЦИФИЧЕСКАЯТЕРАПИЯПРОТОИНВАЗИИПОЛОСТИРТА
Терапияпародонтитастроитсянапринципахмаксимально индивидуализированногокомплексногоподходасучетомобщего иместногостатусабольных. Веськомплекслечебныхмероприятийдолженбытьнаправленналиквидациюэтиологическихипатогенетическихзвеньевразвившегосяпроцесса. Убольныхпародонтитомсинвазиейротовымитрихомонадамисредиэтихмероприятийважноезначениеприобретаетвоздействиенапростейшихвпародонтальныхкарманах. Сэтойцельюприменяютспецифическиепротистоцидныепрепаратыдляместногоиобщеголечения.
Дляместнойтерапиииспользуют 1% р-ртрихопола, 1% р-ртрихомонацида, р-рфурацилина 1:5000, 1% р-рмефенаминатанатрия, 1,5% р-рметиленовогосинего, 0,5-1% р-рперманганатакалия, 40% р-ргексаметилентетрамина. Вышеуказанныепрепаратывводятвпародонтальныекарманыввидеинсталляцийи орошений.
Привыбореметодавведенияиэкспозициилекарственного веществаследуетучитыватьсрокигибелитрихомонад.
Поданнымз.а.флис, И.А.Бенюмовой /1976/ растворытрихопола, трмхомонацида, фурацилинавраздавленнойкаплекультурыпротистовоказываютгубительныйэффектна 30-40 минуте, иногдана 60-й. Следовательно,ихрациональнооставлятьв пародонтальныхкарманахподповязкой.
Свежеприготовленный 1% р-рмефенаминатанатрияна 5-18 минутеобездвиживаеттрихомонады, ахранившийсядлительное времяоказываетэффектна 20-30-йминуте.
0,5-1% растворперманганатакалияобездвиживаетпростейшихна 10-30-йминуте. Этивеществацелесообразновводить ввидеинстилляцийнатурундах, приэтомнеобходимачастая заменанасвежиетурунды, таккакконцентрациялекарствснижаетсявследствиеразбавленияслюной, кровью, экссудатом.
Оченьудобноиметьвкабинетенавескиспорошкоммефенаминатанатрияпо
Гексаметилентетрамин /уротропин/ понашимнаблюдениям вбольшинствеслучаеввызываетнетолькообездвиживание, но ираспадтрихомонаднапротяжении 1-2-хминут. Имможноорошатьпародонтальныекарманыприпомощираспылителястоматологическойустановки.
Результатынашихисследованийпоказали, чтопослевоздействиянатрихомонад 0,02% растворомдекаметоксинаосновная массаособейпрекращаетдвижениена 4-7 минуте, 0,05% раствор хлоргексидинаснижаетдвигательнуюактивностьпростейшихили прекращаетеена 7-10-йминуте.
Несмотрянаположительныйпротистоцидныйэффектуказанныхпрепаратоввраздавленнойкаплеприменениеихвклинике невсегдаприноситжелаемыйрезультат. Очевидно,этосвязано струднодоступностьюзубодесневыхкарманов.
Передвнесениемлекарственныхвеществследуеттщательно удалитьзубныеотложения, провестиобильноеорошениекарманов другимиантисептическимисредствами. Этобудетспособствовать механическомувымываниюпростейших, микрофлоры, экссудатаи такимобразомпротистоцидныепрепаратымогутнепосредственно воздействоватьнапаразитов.
ЧувствительностьTrichomonastenaxклекарственнымсредствам имеетиндивидуальныештаммовыеколебания. Длявыясненияпротистоцидногоэффектаназначаемоголекарствамырекомендуем проводитьопределениечувствительностиротовыхтрихомонадв раздавленнойкапле.
СэтойцельюкаплюштаммаTrichomonastenax9выращеннойнапитательнойсреде, помещаютнапредметноестекло, покрывают покровнымстеклом, добавляют исследуемое лекарственное веществоиисследуютподмикроскопом. Срокомгибели простейшихсчитаюттовремя, когданаступилихраспад.
Местнаятерапияневовсехслучаяхприводитксанации пародонтальныхкармановотпростейших. Обязательнымусловием дляполученияположительногорезультатаявляетсяназначение протистоцидныхпрепаратоввнутрь.
Наиболееширокоеприменениеполучилтрихопол /метрони-дазол)Егоназначаютпо
1/ 1-йдень -
2/ 1-йденьи 2-Йдень -
З/ по
Курсоваядозатрихополадолжнасоставлять
Противопоказаниемкназначениютрихополаявляютсязаболеваниякроветворныхорганов, ЦНС, беременность. Вовремя приемапрепаратанельзяупотреблятьалкоголь, таккакпри взаимодействииснимобразуетсядисульфирам, которыйспособст вуетвозбуждениюиразвитиюпсихоза.
Впоследнеевремявовсеммиререгистрируетсяувеличениечислаштаммов,резистентныхктрихополу.
Нитазол /трихоцид, трихолавал/. Назначаютпо
Тинидазол /фасижин/. Назначают 4 таблеткипо
Макмирор /нифурател/. Помимопротистоцидногоэффекта оказываетвлияниенасмешаннуюбактериальнуюфлору /стрептококки, стафилококки, кишечнаяпалочка, протей/, грибки {Candidaalbikans).Активностьвоздействиянатрихомонадв 10 развыше, чемуметронидазола. Назначаютпо 3-6 таблеток /по 200 мг/ вденьвтечение 1-2 недель.
Следуетподчеркнуть, чтолечениепародонтитапротистоцИднымипрепаратамипроводятобязательновкомплексесдругимимероприятиями /консервативными, хирургическими, ортопедическими/. Неустранивпародонтозогеннуюситуациювполостирта, нельзянадеятьсянаудовлетворительныйрезультат.