Презентация на тему Влияние фемтосекундного лазерного излучения на нейтрофилы человека in vitro

Влияние фемтосекундного лазерного излучения на нейтрофилы человека in vitro.Ульяновский Государственный Педагогический УниверситетИм. И.Н. УльяноваБарышева Татьяна СергеевнаРуководитель: к.б.н., доцент Валкина О.НУльяновск 2011 . Одним из ведущих направлений современной иммунологии является поиск средств и способов воздействия на фагоцитирующие клетки. Перспективным подходом к решению данной проблемы может являться применение физических воздействий, таких как лазерное излучение, в качестве немедикаментозных стимуляторов клеточного и гуморального звеньев иммунитета. В нашем случае облучение нейтрофилов осуществлялось с помощью фемтосекундного лазера. Фемтосекундные лазеры — сверхкороткие, сверхинтенсивные импульсы. Уникальная особенность такого лазера — способность благодаря высокой мощности выполнить задачу взаимодействия с целью, сделав это без передачи тепла на окружающую область, что обеспечивается краткостью импульса. Для измерения столь малых промежутков времени используют специальную единицу - фемтосекунду (фс): 1 фс = 10–15 с. Объектом исследования были нейтрофилы. Их легко узнать под микроскопом по ядру, обычно разделенному на три или более части, в зависимости от степени зрелости. В основе неспецифической клеточной защиты лежит способность нейтрофилов к фагоцитозу. Облучение нейтрофилов фемтосекундным лазером осуществлялось in vitro— это технология выполнения экспериментов, когда опыты проводятся в пробирке, либо, в более общем смысле, вне живого организма.Актуальность работы. Цель исследования Изучить влияние фемтосекундного лазера на нейтрофилы человека in vitro.Задачи исследования1. Изучить динамику показателей кислородозависимого метаболизма нейтрофилов при действии фс лазера 2. Изучить динамику показателей кислороднезависимого (анаэробного) метаболизма нейтрофилов при действии фс лазера 3. Оценить фагоцитарную активность нейтрофилов при действии фс лазера. Материалы и методы. Объектом исследования были нейтрофильные гранулоциты, выделенные из периферической венозной крови 10 здоровых женщин-доноров. Отмытые нейтрофилы облучали в пластиковых кюветах глубиной 1 см. В качестве источника фемтосекундного лазерного излучения использовали волоконный эрбиевый лазер (уникальное изобретение НЦВО РАН при содействии Москвы и УлГУ.) с характеристиками:1. длительность импульса 2х10-13,2. средняя мощность 1,25х10-3 Вт, 3. пиковая мощность 6х103 Вт. 4.перестройка по длине волны 1420 - 1750Были использованы дозы облучения от 8,5 мДж/см2 до 237 мДж/см2 из расчета средней мощности импульса. Дозу облучения высчитывали исходя из средней мощности, времени воздействия, площади поверхности и высоты световода. Методики: 1. Цитохимическое определение активности МПО нейтрофилов проводили по методу Грэкхема-Кноля (1966)2. Цитохимические определение уровня активности КБ Нф проводили по методу М.Г.Шубича (1974) с бромфеноловым синим3. Для цитохимического выявления КФ использовали метод азосочетания по методу Burstone и Li с соавторами (1970)4. Для цитохимическог определения активности ЩФ использовали азосочетания по Rutenburg с соавторами (1965)5. Для определения фагоцитарной активности применяли стандартную методику с использованием дрожжей Результаты исследований. Динамика фагоцитарного индекса нейтрофилов при различных дозах и времени облучения фемтосекундным лазером. Показатели фагоцитарного числа нейтрофилов при различных дозах и времени облучения фемтосекундным лазером. Активность МПО и КБ при облучении фемтосекундным лазером. Динамика активности ЩФ и КФ нейтрофилов при различных дозах и времени облучения фемтосекундным лазером. Вывод1.Воздействие фемтосекундного лазера при дозе 42,3 мДж/см2 увеличивает показатели активности кислородозависимого метаболизма нейтрофилов.2.Уровень КБ снижается при облучении дозой 8,5 мДж/см2 а Кф при этой же дозе возрастает.Активность КБ возрастает при воздействии дозой 237 мДж/см2 , в то время как уровень ЩФ при этой дозе уменьшаетсяПри облучении Нф дозой в 42,3 мДж/см2 показатели ЩФ возрастают, а КФ понижается.3. количество Нф возрастает при дозе облучения в 23,7 мДж/см2 , в сравнении с контролем (41,2 %), а ФЧ, относительно контроля, значительно уменьшается. Спасибо за внимание